细胞培养无菌操作技术

<font><font>1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 % <br />ethanol 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。每 <br />次操作只处理一株<u>细胞</u> 株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或<u>细胞</u> 间 <br />污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。操作间 <br />隔应让无菌操作台运转10 分钟以上后，再进行下一个<u>细胞</u> 株之操作。 <br />2. 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可 <br />以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。实验用品以70 % ethanol 擦 <br />拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在抬面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操 <br />作。 <br />3. 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打 <br />开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45° 角取用， <br />尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。 <br />4. 工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒 <br />感染之<u>细胞</u> 株应特别小心操作，并选择适当等级之无菌操作台(至少Class II)。操作过程 <br />中，应避免引起aerosol 之产生，小心毒性药品，例如DMSO 及TPA 等，并避免尖锐 <br />针头之伤害等。 <br />5. 定期检测下列项目： <br />5.1. CO2 钢瓶之CO2 压力 <br />5.2. CO2 培养箱之CO2 浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水，每周更换)。 <br />5.3. 无菌操作台内之airflow 压力，定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜，预滤网(300 <br />小时/预滤网，3000 小时/HEPA)。 <br />6. 水槽可添加消毒剂(Zephrin 1:750)，定期更换水槽的水。</font> </font>

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