实验40 离体叶绿体对染料的还原作用（希尔反应）

实验40 离体叶绿体对染料的还原作用（希尔反应）

原理

　　离体的完整叶绿体，在合适的氧化剂存在下，例如染料二氯靛酚（DCPIP），当照光时，可以使水光解释放氧气，同时使染料还原，结果染料从原来的蓝紫色变为粉红色至无色。此反应为希尔所发现，故常称为希尔反应。可用分光光度计测定反应前后染料吸光度A的变化，变化在4─5分钟内呈线性关系。

仪器药品

　　721型分光光度计　　　　试管架

　　烧杯　　　　　　　　　 容量瓶

　　移液管　　　　　　　　 试管

　　100mmol/L磷酸缓冲液，　pH7.3（见附表2）

　　0.3mmol/L 2，6椂鹊宸幽疲怀迫—8.7mg二氯靛酚钠，加蒸馏水定容至100ml（如药品纯度低，可适当提高浓度）。

操作步骤

　　1．加样

　　取干净试管6支，分为两组，并分别编成1、2、3号，然后按下表加入试剂。

　　注：(1)叶绿体悬液为实验40所制备。

　　(2)2号管加叶绿体悬液后于沸水浴上煮5分钟，然后用蒸馏水补足丧失的水分。

　　(3)3号管为比色时调节零点用。

　　(4)各试管都在最后加入二氯靛酚以开始反应，并立即摇匀进行比色测定，以代表作用时间为0。各管在加染料之前保存在冰浴中。

　　2．比色

　　当加入染料后立即摇匀倒入相应的比色杯中，迅速测定吸光度，波长为620nm，此即代表0时的吸光度。然后将比色杯置于离150W灯光约60cm处照光，每隔1分钟快速读下吸光度的变化，连续进行5、6次读数，严格控制照光时间。

　　3．将结果以每分钟A620的变化量（△A₆₂₀ /min）为纵坐标，以时间（分钟）为横坐标作图。