希尔反应的观察与测定

希尔反应（Hill reaction）是绿色植物的离体叶绿体在光下分解水，放出氧气，同时还原电子受体的反应，是光合作用反应中的重要现象。本实验的目的是通过希尔反应的观察与测定，了解光合作用在叶绿体中进行的光还原作用。

希尔反应是指离体叶绿体悬液，在光下释放氧气，同时还原所加入的氧化剂或电子受体（高铁盐）的过程。

氧化剂2，6-二氯酚靛酚是一种蓝色染料，接受希尔反应的电子和H⁺ 后被还原成无色，可以直接观察颜色的变化，也可用分光光度计对还原量进行精确测定，测定反应前后染料吸光度 A 的变化，反应变化在 4~5 min 内呈线性关系。

材料：叶绿体悬液。

试剂：

① 0.3 mmol・L^-1 2，6-二氯酚吲哚酚钠（称取 8.7 mg 二氯酚吲哚酚钠，加蒸馏水定容至 100 mL）；

② 0.1 mol・L^-1 磷酸缓冲液（pH7.3）；

③ 石英砂。

器材：

① 试管
② 试管架
③ 水浴锅
④ 移液管。

希尔反应的观察与测定的基本过程可分为如下几步：

1. 加样：取干净试管 6 支，分为两组，并分别编成 1、2、3 号，然后按表 12-1 加入试剂。

注：（1）叶绿体悬液为前一实验制备。

（2）2 号管加叶绿体悬液后于沸水浴上煮 5 min，然后用蒸馏水补足蒸发的水分。

（3）3 号管为调零点的对照。

（4）各试管都在最后加二氮酚呼噪酚钠，且加入后立即摇匀比色，以代表作用时间为 0。各管在加染料之前保存在冰浴中。

2. 比色：当加入染料后立即摇匀倒入相应的比色杯中，迅速测定吸光度，波长为 620 nm，此即代表 0 min 时的吸光度。然后将比色杯置于离 150 W 灯光约 60 cm 处照光，每隔 1 min 快速读下吸光度的变化，连续进行五六次读数，严格控制照光时间。

3. 将结果以每分钟 ∆₆₂₀ 的变化量（∆A₆₂₀・min^-1）为纵坐标，以时间（min）为横坐标作图。

1. 加叶绿体悬液在沸水浴上煮的时候，需用蒸馆水补足蒸发的水分。

2. 加入染料后要立即摇匀并迅速测定吸光度。

3. 配制 0.3 mmol・L^-1 2，6-二氯酚叫噪酚钠时，如药品纯度低，可适当提髙浓度。