紫外线灭菌
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实验二十四 紫外线灭菌
一、目的要求
了解紫外线灭菌的原理和方法。
二、基本原理
紫外线灭菌是用紫外线灯进行的,波长为200—300nm的紫外线都有杀菌能力,其中以260nm的杀菌力最强。在波长一定的条件下,紫外线的杀菌效率与强度和时间的乘积成正比。紫外线杀菌机制主要是因为它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成,从而抑制了DNA的复制。另一方面,由于辐射能使空气中的氧电离成[O],再使O2 氧化生成臭氧(O3 )或使水(H2 O)氧化生成过氧化氢(H2 O2 ),O3 和H2 O2 均有杀菌作用。紫外线穿透力不大,所以,只适用于无菌室、接种箱、手术室内的空气及物体表面的灭菌。紫外线灯距照射物以不超过1.2m为宜。
此外,为了加强紫外线灭菌效果,在打开紫外线灯以前,可在无菌室内(或接种箱内)喷洒3—5%的石炭酸溶液,一方面使空气中附着有微生物的尘埃降落,另一方面也可以杀死一部分细菌。无菌室内的桌面,凳子可用2—3%的来苏尔擦洗,然后再开紫外线灯照射,即可增强杀菌效果,达到灭菌目的。
三、器材
紫外线灯,3—5%石炭酸或2—3%来苏尔溶液,牛肉膏蛋白胨平皿。
四、操作步骤
1.单用紫外线照射
(1)在无菌室内或在接种箱内打开紫外线灯开关,照射30分钟,将开关关闭。
(2)将牛肉膏蛋白胨平皿盖打开15分钟,然后盖上皿盖,置37℃培养24小时。共做三套。
(3)检查每个平皿上生长的菌落数。如果不超过4个,说明灭菌效果良好,否则,需延长照射时间或同时加强其他措施。
2.化学消毒剂与紫外线照射结合使用(1)在无菌室内,先喷洒3—5%的石炭酸溶液,再用紫外线灯照射15分钟。
(2)无菌室内的桌面、凳子用2—3%来苏尔擦洗,再打开紫外线灯照射15分钟。
(3)检查灭菌效果[方法同“单用紫外线照射”(3)]。
由于紫外线对眼结膜及视神经有损伤作用,对皮肤有刺激作用,所以,不能直视紫外线灯光,更不能在紫外线灯光下工作。
五、实验报告
1.结果
记录两种灭菌效果于下表中。
2.思考题
紫外线杀菌的原理是什么?