紫外线灭菌

实验二十四 紫外线灭菌

　　一、目的要求

　　了解紫外线灭菌的原理和方法。

　　二、基本原理

　　紫外线灭菌是用紫外线灯进行的，波长为200—300nm的紫外线都有杀菌能力，其中以260nm的杀菌力最强。在波长一定的条件下，紫外线的杀菌效率与强度和时间的乘积成正比。紫外线杀菌机制主要是因为它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成，从而抑制了DNA的复制。另一方面，由于辐射能使空气中的氧电离成[O]，再使O₂ 氧化生成臭氧（O₃ ）或使水（H₂ O）氧化生成过氧化氢（H₂ O₂ ），O₃ 和H₂ O₂ 均有杀菌作用。紫外线穿透力不大，所以，只适用于无菌室、接种箱、手术室内的空气及物体表面的灭菌。紫外线灯距照射物以不超过1．2m为宜。

　　此外，为了加强紫外线灭菌效果，在打开紫外线灯以前，可在无菌室内（或接种箱内）喷洒3—5％的石炭酸溶液，一方面使空气中附着有微生物的尘埃降落，另一方面也可以杀死一部分细菌。无菌室内的桌面，凳子可用2—3％的来苏尔擦洗，然后再开紫外线灯照射，即可增强杀菌效果，达到灭菌目的。

　　三、器材

　　紫外线灯，3—5％石炭酸或2—3％来苏尔溶液，牛肉膏蛋白胨平皿。

　　四、操作步骤

　　1．单用紫外线照射

　　（1）在无菌室内或在接种箱内打开紫外线灯开关，照射30分钟，将开关关闭。

　　（2）将牛肉膏蛋白胨平皿盖打开15分钟，然后盖上皿盖，置37℃培养24小时。共做三套。

　　（3）检查每个平皿上生长的菌落数。如果不超过4个，说明灭菌效果良好，否则，需延长照射时间或同时加强其他措施。

　　2．化学消毒剂与紫外线照射结合使用（1）在无菌室内，先喷洒3—5％的石炭酸溶液，再用紫外线灯照射15分钟。

　　（2）无菌室内的桌面、凳子用2—3％来苏尔擦洗，再打开紫外线灯照射15分钟。

　　（3）检查灭菌效果[方法同“单用紫外线照射”（3）]。

　　由于紫外线对眼结膜及视神经有损伤作用，对皮肤有刺激作用，所以，不能直视紫外线灯光，更不能在紫外线灯光下工作。

　　五、实验报告

　　1．结果

　　记录两种灭菌效果于下表中。

　　2．思考题

　　紫外线杀菌的原理是什么？