大肠杆菌生长曲线测定

实验二十七 大肠杆菌生长曲线测定

　　一、目的要求

　　了解大肠杆菌生长曲线的基本特征，从而认识微生物在一定条件下生长、繁殖的规律。

　　二、基本原理

　　一定量的微生物，接种在适合的新鲜液体培养基中，在适宜的温度下培养，以菌数的对数作纵坐标，生长时间作横坐标，做出的曲线叫生长曲线。一般可分为延迟期、对数期、稳定期和衰亡期四个时期。不同的微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。

　　测定微生物生长曲线的方法很多，有血球计数法、平板菌落计数法、称重法、比浊法等。本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可利用光电比色计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测得的光密度值（OD值）与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。现已有直接用试管就可以测定OD值的光电比色计（图Ⅶ-10），只要接种一支试管，定期用它测定，便可做出该菌的生长曲线。

　　三、器材

　　培养18—20小时的大肠杆菌培养液，盛有5ml肉膏蛋白胨液体培养基的大试管12支；

　　72型或72．1型分光光度计，自控水浴振荡器或摇床，无菌吸管等。

　　四、操作步骤

　　1．编号

　　取11支盛有肉膏蛋白胨液体培养基的大试管，用记号笔标明培养时间，即0、1．5、3、4、6、8、10、12、14、16、20小时。

　　2．接种

　　用1ml无菌吸管，每次准确地吸取0．2ml大肠杆菌培养液，分别接种到已编号的11支肉膏蛋白胨液体培养基大试管中，接种后振荡，使菌体混匀。

　　3．培养

　　将接种后的11支试管置于自控水浴振荡器或摇床上，37℃振荡培养。分别在0、1．5、3、4、6、8、10、12、14、16、20小时将编号为对应时间的试管取出，立即放冰箱中贮存，最后一同比浊测定光密度值。

　　4．比浊测定

　　以未接种的肉膏蛋白胨培养基作空白对照，选用540—560nm波长进行光电比浊测定。从最稀浓度的菌悬液开始依次进行测定，对浓度大的菌悬液用未接种的肉膏蛋白胨液体培养基适当稀释后测定，使其光密度值在0．1—0．65以内，记录OD值时，注意乘上所稀释的倍数。

　　五、实验报告

　　1．结果

　　（1）将测定的OD值填入下表。

　　（2）绘制大肠杆菌的生长曲线

　　2．思考题

　　（1）为什么说用比浊法测定的细菌生长只是表示细菌的相对生长状况？

　　（2）在生长曲线中为什么会出现稳定期和衰亡期？在生产实践中怎样缩短延迟期？怎样延长对数期及稳定期？怎样控制衰亡期？试举例说明。