总氮含量的测定

一、目的
加深理解蛋白质是生命物质基础；掌握半微量凯氏定氮法测定总氮含量原理和方法。
二、原理
蛋白质是生命的物质基础，是构成生物体细胞组织的重要成分，蛋白质是含氮的有机化合物，是有机态氮的表现形式。样品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵，然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再用盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即得蛋白质含量。用反应式表示如下：

三、实验材料、主要 仪器 和试剂
1．实验材料
植物、动物组织及食品
2．主要 仪器
（1）自动回流消化仪
（2）凯氏定氮仪

图2 微量凯氏定氮蒸馏装置

3． 试剂
（1）0.1%甲基红乙醇液：称取0.1g 甲基红溶于100mL 60%乙醇中。
（2）0.1%溴甲酚绿乙醇溶液：称取0.1g 溴甲酚绿溶于100mL 20%乙醇中。
（3）0.2%溴甲酚绿乙醇溶液：称取0.2g 溴甲酚绿溶于100mL 20%乙醇中。
（4）40%氢氧化钠：称取40gNaOH 溶于水中，定容至100mL。
（5）2%硼酸：称取2g 硼酸用水溶解并定容至100mL。
（6）0.05mol/L 盐酸标准溶液配制：量取4.5mL 盐酸，加水稀释至1 000mL。
（7）溴甲酚绿-甲基红混合指示剂制备：量取30mL 0.2%溴甲酚绿乙醇溶液加入20mL0.1%甲基红乙醇溶液，混匀。
（8）甲基红-溴甲酚绿混合指示剂：1 份（5mL）0.1%甲基红乙醇溶液与5 份（25mL）0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。
（9）其他 试剂 ：无水碳酸钠、硫酸、硫酸铜，硫酸钾均为分析纯