微生物大小的测定

实验十八 微生物大小的测定

　　一、目的要求

　　掌握用显微测微尺测量微生物大小的基本方法。

　　二、基本原理

　　微生物细胞大小，是微生物的形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。由于菌体很小，只能在显微镜下测量。用来测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺（图Ⅳ-4）和镜台测微尺（图Ⅳ-5）。

　　镜台测微尺（图Ⅳ-5）是中央部分刻有精确等分线的载玻片。一般将1mm等分为100格（或2mm等分为200格），每格长度等于0．01mm（即10⁶ μm）。是专用于校正目镜测微尺每格长度的。

　　目镜测微尺（图Ⅳ-4，A）是一块可放在接目镜内的隔板上的圆形小玻片，其中央刻有精确的刻度，有等分50小格或100小格两种，每5小格间有一长线相隔。由于所用接目镜放大倍数和接物镜放大倍数的不同，目镜测微尺每小格所代表的实际长度也就不同，因此，目镜测微尺不能直接用来测量微生物的大小，在使用前必须用镜台测微尺进行校正，以求得在一定放大倍数的接目镜和接物镜下该目镜测微尺每小格的相对值，然后才可用来测量微生物的大小。

　　三、器材

　　枯草芽孢杆菌染色玻片标本，目镜测微尺，镜台测微尺，显微镜，擦镜纸，香柏油等。

　　四、操作步骤

　　1．目镜测微尺的标定

　　(1)放置目镜测微尺取出接目镜，旋开接目镜透镜，将目镜测微尺的刻度朝下放在接目镜筒内的隔板上（图Ⅳ-4，B），然后旋上接目透镜，最后将此接目镜插入镜筒内（图Ⅳ-4，C）。

　　(2)放置镜台测微尺将镜台测微尺置于显微镜的载物台上，使刻度面朝上。

　　(3)校正目镜测微尺先用低倍镜观察，对准焦距，当看清镜台测微尺后，转动接目镜，使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度平行，移动推动器，使目镜测微尺和镜台测微尺的某一区间的两对刻度线完全重合，然后计数出两对重合线之间各自所占的格数（图Ⅳ-6）。

　　根据计数得到的目镜测微尺和镜台测微尺重合线之间各自所占的格数，通过如下公式换算出目镜测微尺每小格所代表的实际长度。

　　目镜测微尺每小格长度（μm）=

　　同法校正在高倍镜和油镜下目镜测微尺每小格所代表的长度。

　　2．菌体大小的测定

　　目镜测微尺校正后，移去镜台测微尺，换上枯草芽孢杆菌染色玻片标本，校正焦距使菌体清晰，转动目镜测微尺（或转动染色标本），测出枯草芽孢杆菌的长和宽各占几小格，将测得的格数乘以目镜测微尺每小格所代表的长度，即可换算出此单个菌体的大小值，在同一涂片上需测定10至20个菌体，求出其平均值，才能代表该菌的大小。而且一般是用对数生长期的菌体来进行测定。

　　3．取出目镜测微尺，将接目镜放回镜筒，再将目镜测微尺和镜台测微尺分别用擦镜纸擦拭后，放回盒内保存。

　　五、实验报告

　　1．结果

　　(1)将目镜测微尺校正结果填入下表。

　　

　　(2)在高倍镜下测量枯草芽孢杆菌大小结果填入下表。

　　

　　2．思考题

　　当接目镜不变，目镜测微尺也不变，只改变接物镜，目镜测微尺每格所量的镜台上物体的实际长度是否相同？为什么？