线栓法大鼠脑缺血模型（MCAO）的制备技巧

如何提高脑缺血的成功率?

经常有朋友费了九牛二虎之力，做了几个大鼠MCAO模型，第二天一看，个个活蹦乱跳，毫无脑缺血症状，当场晕。不成功的主要原因是栓线插入深度不够，即栓线的前端未进入大脑前动脉（ACA），拴线的粗细倒是次要的，0.20～0.26mm均可。因此，保证栓线进入ACA并阻断对侧来的血流，而又不刺破血管是重中之重。

（一）制备技巧

秘诀1：许多文献报道插入深度为18.5±0.5mm（270g左右大鼠），如果按这一标准去做，而不考虑大鼠的个体差异，后果是缺血的程度参差不齐，很多大鼠会出现症状较轻，甚至无症状。建议当插线近18mm（做上标记）时，注意手的感觉，轻缓推进，直至感觉到阻力为止（当遇到阻力后，再插线会见到线弯曲）。可能有人会说，把血管插破了也未感觉到阻力或线遇阻后的弯曲。一个原因是线太硬，另一主要原因是当栓线从血管切口插入后为防止血液从此处流出，需要结扎一条细线，这条线结扎的松紧程度很关键，应在不流血的情况下尽可能的松，这样你会发现进线时很轻松，一旦遇到阻力，就会感觉到。后者至关重要，请体会。

秘诀2：栓线一旦进入ACA，就要把上面提到的那根细线适度扎紧（“适度”很重要，会影响到再灌流时大鼠的生死存亡），此时的关键是动作轻柔，不要使ICA有任何的牵拉，否则栓线会脱出ACA，可能会造成缺血失败。血管外的栓线不要留得过长，更不要缝在皮外，大鼠醒来后会自己拔出。

（二）如何避免栓线插入翼腭A

大鼠仰卧时，ICA从CCA分出后下行（向背侧）约5mm又分为两支A，即走向乳突泡（Mastoid bulla）的 翼腭A和进入颅内的ICA的延伸部分。因为翼腭A的走向几乎和分支前的ICA走向相同，而ICA的延伸部分则是改向头侧走行，所以插线时会很自然的进入翼腭A，需反复拔插几次，碰巧后才能进入颅内，非常痛苦。最初我干脆将翼腭A也分离，然后夹闭或结扎翼腭A的起始部，结果是手术很难操作，效果也不理想。后来又改用另一方法，即在栓线将要插入翼腭A前，用镊子将ICA轻轻往头侧推一下，使ICA和其延长的分支成一直线，同时顺势插线，可很容易的进入颅内。随着经验值的增加，发现完全可以通过改进栓线形状达到目的，即使栓线有一定程度的弯曲，插线时只要保证栓线向屋顶方向弯曲，闭着眼睛也能将线插如颅内，决不会进入翼腭A。

（二）如何避免栓线插入翼腭A

大鼠仰卧时，ICA从CCA分出后下行（向背侧）约5mm又分为两支A，即走向乳突泡（Mastoid bulla）的翼腭A和进入颅内的ICA的延伸部分。因为翼腭A的走向几乎和分支前的ICA走向相同，而ICA的延伸部分则是改向头侧走行，所以插线时会很自然的进入翼腭A，需反复拔插几次，碰巧后才能进入颅内，非常痛苦。最初我干脆将翼腭A也分离，然后夹闭或结扎翼腭A的起始部，结果是手术很难操作，效果也不理想。后来又改用另一方法，即在栓线将要插入翼腭A前，用镊子将ICA轻轻往头侧推一下，使ICA和其延长的分支成一直线，同时顺势插线，可很容易的进入颅内。随着经验值的增加，发现完全可以通过改进栓线形状达到目的，即使栓线有一定程度的弯曲，插线时只要保证栓线向屋顶方向弯曲，闭着眼睛也能将线插如颅内，决不会进入翼腭A。

图3 0.24mm栓线阻断大鼠MCA1h再灌注24h的TTC染色

附：

尼龙线的使用说明

1.实验开始前，将尼龙栓线用75%酒精擦洗干净，在距球端18.5 mm处做标记（用防水的蓝色或黑色记号笔），置0.9%的无菌生理盐水中备用。

2.将大鼠用10%水合氯醛生理盐水溶液麻醉（350mg/kg，ip），仰卧于手术台上。颈正中切开皮肤，依次分离左侧颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA）、颈内动脉（ICA），烙断ECA的分支动脉，结扎ECA远端并烙断。

3.用动脉夹夹闭CCA和ICA。

4.在ECA 剪一小口，用注射器注入60u肝素钠生理盐水溶液0.1ml（注射时，松开ICA的动脉夹。注射后，再次夹闭）。

5.将尼龙栓线插入ECA，并用手术线轻轻用力结扎。

6.松开ICA的动脉夹, 将尼龙栓线顺势插入ICA ，插入18.5±0.5mm至大脑前动脉（ACA）起始部，阻断大脑中动脉（MCA）的血液供应。