细胞传代吹打减少气泡的方法

各位做细胞培养的前辈后辈们，在细胞传代过程中，吹打是很关键的一步啊。能不能有效地快速把贴壁细胞吹打下来，关系到细胞后续的生长和实验啊。当吹打时产生很多泡沫的时候，很难在显微镜下观察清楚有没有完全把细胞吹打下来。

所以，希望大家都来交流一下各自的秘诀吧。如何能避免少起泡沫呢。

本人在试验中有些体会，写出来与大家共勉：

1.有一些细胞可以不用消化液就能够吹打下来。个人认为能不用消化液是最好的。譬如巨噬细胞。我一直维持巨噬细胞，每次传代都不用消化液，吹打的时候我一般会用瓶内未换的剩余旧培养液，这样子比用新的培养基可以减少点泡沫的生成。当然这个一定要求原培养基未被污染。

2. 吹打的时候我们都知道要一点挨着一点吹，这样子不会漏掉地方。而我每次都会首先沿着两条对角线的方向吹打，然后再按照横着或者是竖着吹打。这样子就可以比较容易把细胞吹下来，因为首先细胞的各个方向都受力了，而且比较均匀，细胞比较容易下来，而且对细胞形态的维护比较好。

3.对胶头滴管的要求。胶头滴管头部最好是做成弯曲45度角的形状，一般都是自己用止血钳夹住头部在酒精灯上烧弯。我还发现，如果你吹打的时候，滴管的头部边缘如果是和吹打平面平行的话，反而容易产生泡沫，贴在底部吹，也容易产生泡沫，最好是能够有一个角度顺着你吹打的方向和滴管一致。并且稍微远离吹打面，这样滴管内的液体容易流出，阻力会减小，就不会产生那么多的泡沫了。

4.控制你吹打的节奏，急速地吹打会很快地产生泡沫，用力越大，越容易产生。最好是能够把握住自己的力度和节奏，有条不紊的吹打。我的体会是以自己拿滴管用手的轻松程度为准，如果刚吹几下很快就累的话，那就证明是节奏过快。吹完都不累的话那就是太慢力度也不够。我觉得一般在吹完一遍时指头发困会比较好。这样的节奏能够比较快速而且有效地完成。

本人觉得最关键的操作是不要吹打到底。

培养细胞多年，避免气泡产生要注意以下两点：

1 吹打用的培养基不能太少，如果只有1-2mL，气泡难以避免；

2 吸管每次打出液体后立刻深入液面下吸取液体。

在传代的时候，急速的反复吹打肯定容易产生泡沫，这对细胞不利，所以我们要尽量避免。在操作时尽量选用较大口的吸管，吸液时先将吸管内空气排空，再深入液面以下吸液，吹打细胞时，尽量沿着壁吹出液体，操作轻柔，就可最大程度避免泡沫的产生！