对硝基苯酚pNPP测脂肪酶酶活

问：我正在做这个试验，买了从C2-C16的不同的对硝基苯酚底物，但是令我困惑的是，C10以下的底物，很容易在缓冲液中自发水解，这样就干扰酶活测定。而大于C10的底物又都很难溶解。很是困惑！请问各位做过这项试验的大虾给予我一定的帮助，不甚感激！

答：30毫克的对棕榈酸硝基苯酯（p-NPP）可以溶于10毫升的异丙醇中，稍微水浴加热就可以完全溶解。我是以（p-NPP）为底物，溶液A：30毫克的对棕榈酸硝基苯酯（p-NPP）可以溶于10毫升的异丙醇中。溶液B：含1%triton的磷酸缓冲溶液。溶液A与溶液B1：9混合（现配）。

我现在实验中遇到的问题是：测酶活的底物溶液是无色的，但一加发酵液溶液立刻变为黄色，测量的吸收光值特别大，但把发酵液煮沸20分钟后作对照底物溶液不变色，用碱地定测得脂肪酶活力不高。用标准脂肪酶没有这个现象。实验很郁闷！不知是什么引起底物的变化。

请问各位做过这项试验的大虾给予我一定的帮助，不甚感激！

答：我认为用对硝基苯酚脂肪酸酯底物测定脂肪酶活力是非常灵敏的，我不太明白二楼的困惑，从你的描述来看，你的发酵液里应该有酶活才对。用碱滴定测得脂肪酶活力不高。正常啊，因为PNPP法是比较灵敏的，所以即使你用PNPP法发现颜色反应非常的黄，其用碱滴定可能酶活也比较低。这是我的实验结论，不知道是不是符合大家的经验。