P53蛋白检测
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野生型p53蛋白可以通过诱导凋亡而抑制肿瘤的生长，突变型p53基因丧失了诱导细胞凋亡的能力，从而增强了细胞的恶性转化能力，而且在恶性肿瘤常可检测出突变型p53基因。p53蛋白也可能参与化疗药物诱导的细胞凋亡。本法运用一步夹心免疫法，定量检测野生型或突变型p53蛋白。
样本来源
1. 人、鼠、兔的组织切片
2. 肿瘤细胞株
材料与试剂
1. 过氧化物酶标记的多克隆抗人-p53全抗体（检测抗体）；
2. 洗涤缓冲液（10x）；
3. 过氧化物酶底物液： 四甲基联苯胺（tetramethylmenzidine， TMB）液。
4. TMB终止液；
5. 孵育缓冲液；
6. 链霉亲和素与生物素化抗p53抗体（捕捉抗体）包被的微孔板。
操作步骤
1. 制备标本（如细胞裂解液或组织匀浆），离心10，000xg，10分钟；
2. 将离心后的上清液（水相）加至链霉亲和素与生物素化抗p53抗体预先包被的微孔板；
3. 加入抗-p53-过氧化物酶（1：15）室温孵育2小时；
4. 室温，用1x洗涤缓冲液洗板5次，每次1分钟；
5. 加入过氧化物酶底物液，室温孵育，10-20分钟；
6. 加入TMB终止液，室温反应1分钟，测定450nm吸光度；或直接测定370nm的吸光度。
结果判断
P53蛋白的含量与显色反应的强度成正比。
