P53蛋白检测

野生型p53蛋白可以通过诱导凋亡而抑制肿瘤的生长，突变型p53基因丧失了诱导细胞凋亡的能力，从而增强了细胞的恶性转化能力，而且在恶性肿瘤常可检测出突变型p53基因。p53蛋白也可能参与化疗药物诱导的细胞凋亡。本法运用一步夹心免疫法，定量检测野生型或突变型p53蛋白。

样本来源

1. 人、鼠、兔的组织切片

2. 肿瘤细胞株

材料与试剂

1. 过氧化物酶标记的多克隆抗人-p53全抗体（检测抗体）；

2. 洗涤缓冲液（10x）；

3. 过氧化物酶底物液： 四甲基联苯胺（tetramethylmenzidine， TMB）液。

4. TMB终止液；

5. 孵育缓冲液；

6. 链霉亲和素与生物素化抗p53抗体（捕捉抗体）包被的微孔板。

操作步骤

1. 制备标本（如细胞裂解液或组织匀浆），离心10，000xg，10分钟；

2. 将离心后的上清液（水相）加至链霉亲和素与生物素化抗p53抗体预先包被的微孔板；

3. 加入抗-p53-过氧化物酶（1：15）室温孵育2小时；

4. 室温，用1x洗涤缓冲液洗板5次，每次1分钟；

5. 加入过氧化物酶底物液，室温孵育，10-20分钟；

6. 加入TMB终止液，室温反应1分钟，测定450nm吸光度；或直接测定370nm的吸光度。

结果判断

P53蛋白的含量与显色反应的强度成正比。