慢病毒转染细胞的操作步骤

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一、慢病毒 转染贴壁细胞实验方法

1、慢病毒转染前18-24小时，将贴壁细胞 以1×10^5/孔铺到24孔板中。使细胞在慢病毒转染时的数量为2×10^5/孔左右。

2、第二天，用含有6 μg/ml polybrene的2ml新鲜培养基 替换原培养基，加入适量病毒悬液。37℃孵育。

3、(对polybrene毒性敏感的细胞选作此步骤)4小时后加入2ml新鲜培养基以稀释polybrene。

4、继续培养24小时，用新鲜培养基替换含有病毒的培养基。

5、继续培养。如果慢病毒含有荧光蛋白，一般转染48小时后可见明显荧光表达，72小时后更加明显。如需FACS检测转染效率，可在转染后72-96小时进行。如果慢病毒含有抗性基因并且需要加药筛选，可以在转染3-4天后开始加药。

二、慢病毒转染悬浮细胞实验方法

1、在2×10^5/ml悬浮细胞中加入polybrene至6 μg/ml和适量病毒，充分混匀。37℃孵育。或者150g室温离心4小时(选作，部分难转染的细胞系采用此步骤可以提高转染效率)。

2、(对polybrene毒性敏感的细胞选作此步骤)4小时后(或离心结束后)加入等体积新鲜培养基以稀释polybrene。

3、继续培养3-4天。中间视细胞生长情况可传代或换液。

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