薄层色谱法的应用
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薄层色谱是化学的一种分离和分析方法。
(1)定性鉴别
化学上经典的定性鉴别,例如经典的有机定性分析或经典的毒物分析,是利用各种化合物的溶解度不同和所含功能基的不同,用溶剂提取或用试剂处理,把它们分组或分为单一组分,然后作试管反应或点滴反应(颜色反应),或根据它们衍生物的理化性质进行定性鉴别。这种方法的缺点是样品用量较大,分离手续麻烦,分析时间较长(几小时或几十个小时),并可能有杂质干扰,现采用合适的展开剂和显色剂在薄层上作为分离和鉴别,根据样品中组分的值和显色情况,同时用标准作对照,一般即能确证为某一化合物,用薄层色谱法定性,样品用量小,分离方便,分离时间短(几分钟或几十分钟),检出灵敏度高。
例如,在毒物分析中检验是否巴比妥安眠药中毒时,取胃内容物或尿样品,先用盐酸酸化后,用乙醚提取,乙醚提取液脱水,过滤蒸干,溶于无水乙醇中,点在硅胶版上用氯仿无水乙醇(36:1)展开,用硫酸汞二苯偶碳酰肼试剂显色,并用标准品对照,依次见出巴比妥,苯巴比妥,戊巴比妥和异巴比妥。鉴别速度快(1小时),这对于抢救中毒患者和及时为医生提供治疗方案极为重要。
(2)药品的质量控制和杂质检查
药品的纯度,通常用熔点,吸光值等物理常数作为鉴定的指标。但是薄层检查也是药品质量控制和杂质检查的一种有效方法,有时甚至比一般方法更有效。一些国家的药典和药品规范已经采用。方法是把一定量的样品溶液(例如,相当于样品10%)点在薄层上,用展开剂展开并显色,同时用纯品作对照,如果样品不只显示出纯品位置一致的一个斑点,则表示含有杂质。
进一步可用薄层作杂质的限量检查。在上例中,如果已经知道显色剂对杂质的最小检出量为0.1%,在薄层上点样后不显出杂质斑点,则杂质的量低于0.1%,或低于限度,也就是样品的纯度不低于99.9%。例如镏体药物的合成和精致工作中,常含结构类似的杂质,即按上述方法控制其质量和杂质的限量。
(3)化学反应进程的控制
反应副产物的检出以及中间体的分析,在化学反应进行到一定时间或反应终了时,把反应液取出作薄层分析,可以知道还剩下多少原料药未起作用。方法是把反应液或其有机溶剂提取液点在薄层上,同时点原料作参比对照,看薄层上是否出现原料药斑点。还可以用薄层检查反应副产物。如果化学反应分步进行,则每一步反应的中间体的质量和产率也都可用薄层进行定性和定量。例如在合成强力霉素的过程中,需要中间体甲烯土霉素氢化物为脱氧土霉素。
氢化反应是否完全,可用薄层检查,如果反应完全,则反应釜中几乎没有或只有极少量的甲烯土霉素存在,薄层板上只显示出一个脱氧土霉素,如果薄层板上有上下二个明显的斑点,表示反应还没有完全,尚需继续还原,直到只显示出脱氧土霉素的一个斑点为止才能出料。
(4)柱色谱法分离条件的探索
柱色谱法的实验条件,例如选用什么吸附剂和洗脱剂较好,各个组分按什么顺序从柱中洗脱出来,每一分洗脱液中是含单一组分或就含几种没有分开的组分等,都可以在薄层上进行探索和检验。薄层上所有的展开剂虽不完全照搬柱色谱法上,但仍有参考价值。