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HE染色(脱蜡、水化、染色、脱水、封片)

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28410

脱蜡

在二甲苯脱蜡之前可以先在60℃烤箱内0.5~1小时,这样可以使切片粘附更牢固不易脱片,也有利于脱蜡。

二甲苯I 10分钟

二甲苯II 5分钟

切片用二甲苯脱腊,应视不同的季节有不同的脱蜡时间,在夏天,室温较高,脱蜡较迅速,往往在2-3min就可脱蜡干净,二在冬季,时间应相对延长。

切片在进入二甲苯前,可用电吹风吹切片,使切片上的蜡处于熔解状态,这样脱蜡较迅速,尤其是冬天。

在二甲苯脱蜡之前可以先在60℃烤箱内0.5~1小时,这样可以使切片粘附更牢固不易脱片,也有利于脱蜡。

水化

100%酒精I 5分钟

100%酒精II 5分钟

95%酒精I 5分钟

95%酒精II 5分钟

85%酒精 3分钟

75%酒精 2分钟

蒸馏 水冲洗 1分钟

笔者认为,切片用酒精将二甲苯彻底消除后,在进入苏木素染液前,可用电吹风吹干,这一步对于切片没有充分的烤片时间,对于血块等的切片来说,尤为重要,切片经此步骤,增加了附贴的牢固性,减少切片在染色过程中脱离载片的机会,保证了染色的成功率。另者,切片进入苏木素染液全无水,可保证了苏木素染液的浓度和PH值,延长其使用寿命。以往切片进入苏木素染液前,都须经水洗,每次染色,都带入不少的水分,稀释了苏木素染液的浓度,改变了它的PH值,使染液寿命缩短。

染色

苏木精染液中浸5~20min

自来水冲洗3~5min

1%盐酸酒精分化5~30s

自来水冲洗1~3min

0.5%伊红酒精染色 1分钟

蒸馏 水洗 2分钟

苏木素染液有多种,常规应用的通常为明矾苏木素,明矾苏木素又有Harris苏木素,Mayer’s苏木素,和Ehrish苏木素等。

盐酸酒精分化切片,浓度有0.25%,0.5%和1%根据各人的情况而使用

伊红酒精浓度有0.25%,0.5%和1%之分,根据各单位的情况而定。

分化伊红须用浓度较高的酒精,以往伊红染色以后,用低浓度的酒精分化,洗去多余的染液,实践中发现低浓度的酒精褪色能力特强,如果掌握不好,染上的伊红,便会被褪去大部分。改用较高浓度酒精后,这种现象便不会出现。

伊红有水溶的和醇溶的,如果用的是水溶的,应该在脱水前进行染色,如果是醇溶的,应使用与溶解伊红等浓度的酒精开始脱水。

盐酸酒精:在100ml的70%酒精内加0.5~1ml的浓盐酸。

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