线粒体和液泡系的超活染色与观察

实验原理

活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。其目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何理化变化以致引起细胞死亡。活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。

根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，活体染色可分为体内活染与体外活染两类。体内活染是以胶体状的染料溶液注入动植物体内，染料的胶粒固定于细胞内某些特殊结构内以达到易于识别的目的。体外活染又称超活染色，是由活的动植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料因其＂电化学＂特性与被染部分相互吸引被选择固定在活细胞的某种结构中而显色．但不是任何染料都可作为活体染色剂使用，一般应选择那些无毒或毒性小的碱性染料(易溶于类脂质)并配成较稀的溶液来使用。詹纳斯绿Ｂ和中性红两种碱性染料是活体染色中重要的染料，对线粒体和液泡系的染色各有专一性．

詹纳斯绿B可专一性地对对线粒体进行活染，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色;而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基。中性红对液泡系的染色具有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核和细胞质不着色，这可能与液泡中的某些蛋白质有关。

实验用品

1 器材：显微镜、恒温水浴锅、、剪刀、镊子、解剖刀、载玻片、盖玻片、吸管、牙签、吸水纸

2 试剂：

①Ringer溶液:氯化钠0.85g，氯化钾0.25g，氯化钙0.03g

②1/5000詹纳斯绿B溶液:称取0.5g詹纳斯绿B溶于5ml Ringer溶液中，稍加热(30-40℃)溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。取1ml1%原液加入49mlRinger溶液，即得1/5000工作液，将其装入棕色瓶中备用。最好现配现用，以保持充分的氧化能力。

③1/3000中性红溶液:称取0.5g中性红溶于50ml Ringer液，稍加热(30-40℃)溶解，用滤纸过滤，装入棕色瓶中于暗处保存。临用前取1ml1%原液加入29mlRinger溶液，即得1/3000工作液，将其装入棕色瓶中备用。

3 材料：

人口腔上皮细胞 洋葱鳞茎内表皮细胞 绿豆幼根根尖

实验方法

（一）线粒体的超活染色与观察

1 人口腔黏膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察

载玻片于37℃恒温水浴：

1/5000詹纳斯绿B溶液　　2滴

人口腔上皮细胞黏液　　　牙签刮取

染色10-15 min，盖上盖玻片，吸去周围染液，显微镜下观察

2 洋葱鳞茎内表皮细胞线粒体的超活染色与观察

载玻片于37℃恒温水浴：

1/5000詹纳斯绿B溶液1滴

洋葱鳞茎内表皮镊子撕取

染色10-15 min，吸去染液，加Ringer溶液1滴，盖上盖玻片，显微镜下观察　

（二）绿豆幼根根尖液泡系的中性红染色观察

载玻片于37℃恒温水浴：

初生绿豆幼苗根尖（1-2 cm）纵切面切片1片

1/3000中性红溶液1滴

染色5-10 min，吸去染液，加Ringer溶液1滴，盖上盖玻片压扁根尖，显微镜下观察