流式荧光法检测多肿瘤标志物的方法学评价

目前，用于肿瘤标志物检测的三大技术为，放射性核素标记抗原或抗体的放射性免疫测定（RIA）、用酶标记的酶联免疫测定（EIA）和用荧光素标记的荧光免疫测定（FIA）。RIA由于有放射性物质，已逐渐被EIA和FIA代替。流式荧光技术是流式细胞术与酶联免疫吸附实验相结合的技术。它的技术原理是，用两种荧光染料，按不同比例，把微小的乳胶颗粒（微球）分别染成上百种不同的能发出荧光的颜色。

然后再把针对不同检测物的蛋白（如包被抗体）以共价方式交联到不同颜色的微球上。应用时，先把针对不同检测物的微球混合，再加入待测血清。在悬液中，微球上的抗体与待测血清中的抗原特异性结合，并加上荧光标记。然后，微球被微量液体传输系统排成单列通过检测器。检测器内的一束荧光判定微球的编号，另一束荧光测定该编号微球上的荧光强度，通过电脑处理后获得待测物质的含量。

灵敏度试验结果表明，各指标的检测灵敏度远低于极限（cutoff）值；干扰试验结果表明，在一份低值血清样本中加入高浓度的血红蛋白、甘油三酯、胆红素三种干扰物质，并不影响结果的判断。本研究的结果表明，在测定范围内，流式荧光法测定CEA、AFP、CYFRA211和NSE的线性良好。由于该方法对每种检测指标最少进行100个微球的计数，而后取平均值，相当于对每例样本重复了至少100次检测，从而保证了检测结果的准确性和重复性。精密度试验表明该方法重复性好。由于反应在悬浮溶液中进行，因而加快了检测速度，所以又有“液体芯片”之称。

流式荧光法与罗氏公司EI70电化学发光法相关性良好，相关系数在0.8992到0.9760之间，特别是AFP和CEA两个指标的相关系数在0.97以上，可见两者测定结果的可靠性是相同的。但是，从200份标本测定结果的比较可以看出，流式荧光法结果普遍低于罗氏公司EI70电化学发光法，在临界值附近尤其明显。其原因可能是与不同试剂制备采用的抗体不同有关。