远志对小鼠的化痰作用(酚红法)实验指导

中药药理学实验

远志对小鼠的化痰作用(酚红法)

【目的】
1.学习酚红从呼吸道排泄的方法。
2.观察远志对小鼠祛痰的作用。

【原理】指示剂酚红自小鼠腹腔注射并经腹腔吸收后，可部分地由支气管粘液腺分泌入气道，有祛痰作用的药物在使支气管分泌液增加的同时，其由呼吸道粘膜排出的酚也随之增加。因而可从药物对气管内酚红排泌量的影响来观察其祛痰作用。酚红在碱性溶液中呈红色，将从道中洗出的液体，用比色法（分光光度计）测出酚红的排泌量。从而得出药物的祛痰作用。

【器材】 注射器、小 试管 、 试管 架、手术器材、蛙板、大头针、722 分光光度计 等。

【药品】 100%远志煎夜、0.5%酚红溶液、5%NaHCO3、生理盐水（NS）。

【动物】 小白鼠

【方法】
1.每组取小鼠6只，随机分成两组，禁食不禁水8～12h，按0.2ml/10g体重ig给药，对照组给予同等剂量的NS，45min后ip酚红0.5ml，15min后用脱颈椎处死或用湿布闷死，仰位固定于蛙板上手术分离气管。
2.用1ml注射器吸取0.5mlNaHCO3　,推注入气管内，反复连续推抽3次灌洗呼吸道，洗出液收集在试管中，按上述方法重复3次。
3.洗出液沉淀或离心，用722型 分光光度计 （波长546nm），直接测浓，计算祛痰指数，与对照组比较，进行统计学处理（t检验）。

【结果 】 汇总全班数据，填入表 4-1、2。

计算公式：

（ 1） (用于例数相等) 自由度（ f）=n 1 +n 2 -2

（ 2） （用于例数不等）

表 4-1

组 别	浓度（ µg/ml）
NS组	远志组
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

表4-2 远志对小鼠酚红排泌量的影响（ ）

组 别	动物数 （ n）	剂 量 （ g/kg）	浓度 （ µg/ml）	祛痰指数 （ %）
NS
远志

【附注 】

1.小鼠呼吸道冲洗法 实验动物分组和给药方法等同上，ip0.5ml酚红后15min小鼠脱颈椎处死或用湿布闷死，仰位固定于蛙板上，剪开颈前皮肤，分离气管，于喉头下将8号针头插入气管内约0.3cm，用丝线由气管下结扎固定后，用1ml注射器吸取5%NaHCO3 1ml，通过针头来回灌洗呼吸道3次，最后一次将灌洗液抽出注入试管中。按上述方法连续操作3次，冲洗共9次，收得灌洗液约3ml，置于试管中，静置或离心后取上清液，用分光光度计检测浓度，与对照组比较，进行统计学处理。

2.酚红标准液的配制 用 电子天平 准确称取一定量的酚红，以5%NaHCO3溶解，使每1ml含酚红1000μg。然后依次稀释，配成每ml含1.0、3.0、5.0、10μg，用722型分光光度计测定，取其中1～2个浓度作为标准测定管。

3.0.5%酚红溶液：取0.5g酚红用NaOH（1N即4%）溶解后用NS稀释到所需浓度。

4.祛痰指数 动物数（n）=30，祛痰指数≥2时表明有差异。

【注意】
1.给药至处死动物的时间必须准确。
2.解剖时，须将气管周围组织去除干净，气管段周围如果粘附有血液应立即用 滤纸 吸净。
3.呼吸道冲洗时，NaHCO3用量要准确，灌洗时动作要轻，以免穿破气管和肺脏，抽推速度也尽可能相同，并尽可能将洗液抽尽。

【思考题】
1.根据实验结果，分析中药化痰作用的强弱，并与临床使用情况比较，效果是否一致？
2.根据远志的药理作用，分析远志祛痰作用的机制可能是什么？