透射免疫比浊法定量测定血清中D -二聚体的实验评价

【摘要】 目的 对透射免疫比浊法定量测定血清D —二聚体的方法进行临床实验评价。方法 实验评价包括精密度、线性测定、回收实验以及干扰实验。结果 该D-二聚体定量测定试剂在精密度测定CV%小于5%，回收率在95~99%。线性测定良好，可达16ug/ml，回归方程为Y=1.0133X-0.0076，相关系数r=0.9997。对胆红素、血红蛋白、甘油三酯均具有很好的抗干扰能力。结论 该试剂符合临床使用的要求。

【关键词】 D-二聚体定量测定，精密度，线性，干扰

近几年来，应用D-二聚体作为有症状的深层静脉血栓（VTE）的诊断指标已得到广泛的研究。[1]许多研究表明D-二聚体测定对于深层静脉血栓（VTE）、微细血管血栓（DVT）和肺梗死（PE）病症有高度的敏感性。而采用D-二聚体定量测定可以作为排除深层静脉血栓（VTE）、微细血管血栓（DVT）和肺梗死（PE）的第一步筛选。[2]

1 材料与方法

1.1 试剂：

1.1.1 D —二聚体透射免疫比浊法定量测定试剂，滴宝牌，批号021022。

1.1.2 D —二聚体定量测定试剂配套定标液，滴宝牌，批号021022。

1.1.3 D —二聚体定量测定试剂配套质控，滴宝牌，批号021022。以上试剂均由华鑫科技有限公司生产并提供。

1.2 使用仪器：OLYMPUS AU800

1.3 实验方法：

1.3.1 精密度测定：

1.3.1.1 批内精密度测定：取高、低值质控，用上述D-二聚体定量测定试剂分别进行各20次测定。分别计算平均值（ x — ）、标准差（s）、变异系数（CV%）。

1.3.1.2 天间精密度测定：取高、低值质控，用上述D-二聚体定量测定试剂分别进行测试，连续测定20天，分别计算平均值（ x — ）、标准差（s）、变异系数（CV%）。

1.3.2 回收率实验：取一个略较参考值高的非溶血、黄疸、脂浊血清标本进行测定十次，计算均值，然后在血清中添加已知不同浓度的标准物，添加浓度分别为(ug/ml) 0.00、5.00、10.00、15.00，再进行测定，最后计算回收率（Re%）。

1.3.3 线性测定：取一个高值标准物进行梯度稀释，然后各浓度进行测定，将测定值与标准值进行线性回归分析。

1.3.4 干扰实验：按NCCLS EP7-P文件的要求，对D-二聚体定量测定试剂进行干扰实验研究。用高、中、低三个浓度的血清标本，按浓度梯度分别添加胆红素、血红蛋白、甘油三酯，测定各干扰物对结果的影响。

2 结果

2.1 精密度检查

分别对高、低值质控血清进行测定，检查试剂在高值和低值标本时的测定精密度。另外考虑到试剂稳定性的问题，也增加了天间变异的测定。实验结果见附表。

该试剂在精密度方面完全符合临床使用的要求，试剂在高、低值范围内的重复性性能均表现良好，测定结果均在靶值范围内。

2.2 回收率测定

该试剂在各浓度段的回收率均大于95%，平均为98.4%。非特异性结合的影响较少，使用上可合乎临床上使用的要求。

2.3 线性测定

D-二聚体的正常参考值为5ug/ml，在深层静脉血栓（VTE）病人中数值可达到10ug/ml以上。从实验结果可见，该试剂的线性测定范围可达到16ug/ml，线性良好（y = 1.0133x - 0.0076，r = 0.9997），完全满足临床的测定要求。线性测定结果见附图。

2.4 干扰实验

该D —二聚体定量测定试剂在胆红素浓度为0~342umol/L，血红蛋白浓度为0~500g/L，甘油三酯浓度为0~16.95mmol/L的干扰情况下，各浓度范围的平均偏差均在6%内，为临床上使用的可接受范围。

3 讨论

D —二聚体试剂盒按性质主要分有两大类：定性与定量；按采用的方法学又分为乳胶法、ELISA法和免疫比浊法。乳胶法的试剂盒基本上是定性测试，它要求操作者根据乳胶凝集的情况来分别阴性与阳性标本。采用这种方法对一些临界值标本往往难于判定，[3][4]由于要依赖操作者的判断，所以准确性较其他方法低。

ELISA法的敏感性较乳胶法的好，是测定D-二聚体的经典方法，但它存在操作费时、复杂，不适用于急诊应用等缺点，即使现在有些厂家的试剂盒采用快速ELISA方法，但报告结果也要30分钟以上，而用户还要另外购买相关免疫测定机器，增加了操作成本。由于深层静脉血栓（VTE）、微细血管血栓（DVT）和肺梗死（PE）病症发病时间较短，通常在数小时内，所以一种快速简便的D-二聚体定量测定方法，将大大有益于临床对深层静脉血栓（VTE）、微细血管血栓（DVT）和肺梗死（PE）病症的诊断。[5]

该D-二聚体定量测定试剂采用透射免疫比浊法，其反应原理是采用极细的乳胶粒子包被D-二聚体抗体。当血清中含有D-二聚体时产生特异的抗原抗体反应，导致光产生散射效应，从而引起反应系统中吸光度的增加，由此定量测定出血清中D-二聚体的含量。该试剂盒可适用于各种生化分析仪，使用方便，操作简单，在不增加仪器成本的基础上，可实现定量测定，测试时间只需10分钟，满足了临床急诊需要，特别对深层静脉血栓（VTE）、微细血管血栓（DVT）和肺梗死（PE）病症的提前诊断意义更大，另外也可作为临床溶栓治疗的动态观测指标。

综合上述实验分析结果，该试剂在临床使用方面表现了良好的操作性能，特别是采用了免疫比浊法原理，使测定的特异性得到增强，在生化分析仪上可进行检定，值得在各大中型医院中推广使用。

参考文献

1、郭雪梅，王鸿利. 快速D-二聚体检测在诊断静脉血栓形成中的应用进展. 中国实验诊断学，2000，4(1):41~3

2、Bounameaux H, Moerloose P, Reber G, et al. D-dimer testing in suspected venous thrombolism: an update. Q J Med 1997,90:437~42

3、Yu M, Nardella A, Pechet L. Screening tests of disseminated intravascular coagulation:guidelines for rapid and specific laboratory diagnosis. Crit Care Med 2000 28(6):1777~80

4、Michiels JJ, Pattynama PM. Exclusion and diagnosis of pulmonary embolism by a rapid ELISA D-dimer test and noninvasive imaging techniques within the context of a clinical model. Clin Appl Thromb Hemost 2000,6(1):46~52

5、Blackwell K. Haroon Z, Broadwater G,et al. Plasma D-dimer levels in operable breast cancer patients correlate with clinical stage and axillary lymph node status. J Clin Oncol 2000,18(3):600~