常用的同位素及标记化合物

一、常用标记化合物

14 C常用的标记化合物为多种氨基酸，如亮氨酸、赖氨酸、脯氨酸等。其中最常用的是亮氨酸，因这种氨基酸在各种蛋白质中都广泛存在。 14 C标记的位置有多种，但在应用于mRNA的 生物 活性测定时都可采用。至于选择何种氨基酸，需视拟合成的蛋白质性质、成分而定。

3H常用的标记物有氨基酸或核苷酸。氨基酸的用途同 14 C的氨基酸。核苷酸中最常用的核苷如尿嘧啶核苷及胸腺嘧啶核苷，用于细菌及哺乳动物细胞培养时的核酸标记。核苷三磷酸中以a型的NTP及dNTP为最常用。此处N代表A、G、C、U或T四种碱基。用于核酸的标记，如缺口翻译标记。也可用于染色体原位杂交或电镜核酸分析等。

35 S标记的氨基酸最常用的是蛋氨酸，用途同 14 C标记。[α- 35 S]dNTP中的α位磷酸基中的氧用硫取代，得到的核苷三磷酸，可用于核苷酸序列分析，也可用于缺口翻译法标记DNA。

32 P常用标记物为各种核苷三磷酸。 32 P的标记分两大类。一类标在γ位置，做磷酸转移法标记核酸用，另一类标在α位置，做核苷酸转移标记核酸用。如标记核酸的末端常用[γ- 32 P]ATP，而在缺口翻译标记时则用各种[a- 32 P]dNTP。

125 I常用的是碘化钠溶液，主要用途是标记单链核酸如RNA等分子以及蛋白质。

二、放射活性的常用国际单位
目前国际上通用的放射活性单位为贝克勒尔（becquerel），一个单位相当于每秒一个核衰变数。不过多年来通用的居里单位仍占主要地位。在说明比放射活性与放射活性浓度时，仍用居里单位，只有某些标准溶液采用贝克勒尔单位。现将两者换算关系列在下面。
1贝克勒尔（Bq）=每秒一个核衰变
1Ci=3.7×10 10 /s
1mCi=3.7×10 7 /s

1μCi=3.7×10 4 /s

放射活性浓度经常是以每亳升溶液的居里（Ci/ml）来标明。从国外购买的同位素，其主要溶液有以下几种浓度，如 14 C的标记化合物常为50μCi/ml(1.85MBq/ml)或200μCi/ml (7.4MBq/ml)， 3 H标记化合物则常为1mCi/ml(37MBq/ml)。

虽然有些标记物选择其他更大浓度更为适合些，如 32 P的标记化合物的两类，一类贮存在酒精水溶液中，其浓度为1mCi/ml，用前要减压、真空抽干酒精和水，以获得无水可用的 32 P标记物。另一类为水溶液，其浓度为10mCi/ml，浓度较大，不需抽干，即可直接应用。以稳定性相比，在含酒精的水溶液中稳定性好。

三、衰变因数
半衰期是指放射性原子核衰变掉一半所经过的时间，用T1/2表示。半衰期很长的放射性同位素，在使用期间放射性变化不明显，如 14 C与 3 H。 3 H的半衰期为12.43年，如果标记物不受化合物分解影响，贮存5年，其放射性将保留原有的75%，而5年已远超过一般实验的日程。短半衰期的放射性同位素标记物，在使用时必须注意放射性的降低。附表列出了同位素经过不同时间所保留的原放射性的百分数。用查出的数据乘以原有放射性，即可求得该时间的放射性。

32 P在不同时间里保留的原放射性的百分比（%）（半衰期：14.3d）

天数（d）	百分比（%）
0	12 24 36 48 60 72 84(h)
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52	1.000 0.824 0.679 0.559 0.460 0.379 0.312 0.257 0.212 0.175 0.144 0.119 0.098 0.080	0.976 0.804 0.662 0.546 0.449 0.370 0.305 0.251 0.207 0.170 0.140 0.116 0.095 0.078	0.953 0.785 0.646 0.533 0.439 0.631 0.298 0.246 0.202 0.166 0.137 0.113 0.093 0.077	0.930 0.766 0.631 0.520 0.428 0.353 0.291 0.239 0.197 0.162 0.134 0.110 0.091 0.075	0.908 0.748 0.616 0.507 0.418 0.344 0.284 0.234 0.192 0.159 0.131 0.108 0.089 0.073	0.886 0.730 0.601 0.495 0.408 0.336 0.277 0.228 0.188 0.155 0.127 0.105 0.086 0.071	0.865 0.712 0.587 0.483 0.398 0.328 0.270 0.223 0.183 0.151 0.124 0.102 0.084 0.070	0.844 0.695 0.573 0.472 0.389 0.320 0.264 0.217 0.179 0.147 0.121 0.100 0.082 0.068

例：250μCi的腺嘌呤核苷5’-[a- 32 P]三磷酸贮存3周（21d）后放射性还有多少？
查表： 32 P21d的数值为0.361，250μCi×0.361=90.2μCi，即经过3周贮存，其放射性只余90.2μCi。
对于比放射活性的改变，过去因标记物的比放射活性比较低，故只用半衰期长短来计算，现在有了很高的比放射活性标记物，如用 32 P标记的核苷三磷酸，其比放射活性>5000 Ci/mmol。即有一半以上的磷原子被标记，就不能只考虑半衰期的关系。即在一个半衰期后，放射活性降低一半，但比放射活性则保留一半以上。

四、 32 P标记核苷酸的干燥

大多数公司提供的 32 P-dNTP都是经过浓缩的、性质比较稳定的水溶液。 32 P-dNTP同位素水溶液可直接加入混合物的反应体系。然而，有些公司提供的 32 P-dNTP溶解在50%的乙醇溶液中。

去除乙醇的处理方法：

①用一个自动微量吸量管把反应所需的 32 P-dNTP量小心吸移入Ep管。

②用蜡膜封口。

③用针在蜡膜上扎些孔。

④把装好的Ep管放在真空干燥器冷冻干燥。

⑤干燥后去掉蜡膜加入水至 离心管 中，在振荡器中振荡15min。

⑥把预先配好的反应混合物加入到EP管中，通过振荡旋转混匀，然后按反应条件的要求进行反应。