植物组织内叶绿素的定量测定及吸收光谱

1. 目的

学习测定叶绿素总量及吸收光谱的技术

2. 器药品及材料

菠菜叶或其他新鲜叶子，80%丙酮、研钵、瓷漏斗、分光光度计、吸滤甁

3. 实验步骤

a) 绿素提取

称取0.5g鲜重切成小块的菠菜叶片。放于干净的研钵内。加20ml80%丙酮（V/V），把组织研成匀浆（大约研3分钟），小心地把绿色液体转移到一个有滤纸垫的瓷漏斗内。当过滤提取液时（抽滤），用另外10ml80%丙醇重复研磨匀浆3-4分钟之后，如前一样将第二次提取液到含第一次提取液的吸滤甁内。

第二次提取之后，缓缓就应该没有叶绿素了，假如仍提取不完全，另用10ml80%丙酮重复研磨，将匀浆过滤到含有其他滤液的吸滤甁内。用10ml80%丙酮冲洗研钵和漏斗的边缘以保证全部叶绿素被收集。为了便于计算叶绿素的量，用80%丙酮将滤液定容至50ml
如果实验的植物材料用量少于0.5g也可相应改变用于提取的80%丙酮的量，使最后体积依照每毫升丙酮提取10mg植物材料。

b) 叶绿素测定

将叶绿素提取液倒入比色杯中，用光电比色计在652毫微米测量光密度。以80%丙酮作空白对照计，以每克被提取的叶组织所毫克数。

D625：叶绿素提取液在波长652毫微米下的光密度读数

V：80%丙酮一叶绿素提取液的最终体积

W：提取用的组织鲜重克数

在652毫微米处，叶绿素a和b交叉。同时在这种波长下34.5是两种色素的比吸收系数。

c) 在80%丙酮中叶绿素的吸收光谱

以80%丙酮作空白对照，在400-700毫微米范围内以20毫微米间隔测定并记录叶绿素提取液的光密度读数，在最大吸收部位，以5毫微米为间隔增加读数。以光密度读数为纵坐标，波长为横坐标，绘叶绿素吸收光谱图