叶绿素a和b的吸收光谱曲线

叶绿素a和b的吸收光谱曲线

原理

　　叶绿素能够吸收一定波长的可见光，而让其他波长的光透过，这是叶绿素的光学特性之一。将叶绿素的吸光度对波长作图，绘成的曲线，称为叶绿素的吸收光谱曲线。了解叶绿素的吸收光谱曲线，有助于理解光合作用中的光性质。

仪器药品

　　751型（或721型）分光光度计 　　　　 台天平

　　剪刀　　　　　　　　　　　　　　　　研钵

　　移液管　　　　　　　　　　　　　　　漏斗

　　标本瓶（约15×40cm） 　　　　　　　 厚滤纸(3mm)

　　毫米方格纸 　　　　　　　　　　　　 毛细管

　　丙酮 　　　　　　　　　　　　　　　 乙醚

　　石油醚 　　　　　　　　　　　　　　 丙醇

　　石英砂

操作步骤

　　1．分离叶绿素a和b

　　用滤纸层析法按照实验33注中所述的方法，分离制备得到叶绿素a和b纯品溶液。

　　2．测定叶绿素a和b的吸光度A

　　将制备得到的叶绿素a丙酮溶液，注入光径为1cm的比色杯中，另以80%丙酮作校零对照，于波长400梍700nm之间，每间隔5nm，读得叶绿素a的吸光度值。

读数时先调节波长，将对照比色杯推入光路中，调节吸光度为0（即透光度为100），然后将装有叶绿素a的比色杯推入光路中，读下吸光义。以后每次更换波长时都需要用对照调节吸光度为0，而后再读下叶绿素a的吸光度。

　　以同样方法测定叶绿素b在波长400─700nm之间，每间隔5nm时的吸光度。

　　3．根据测定的结果，以波长(nm)为横坐标，以吸光度(A)为纵坐标，在毫米方格纸上分别绘制叶绿素a和b的吸收光谱曲线。