Folin-酚试剂配制

试剂

试剂甲：
A液：Na2CO3 10.00g
NaOH 2.00g
酒石酸钾钠（或钾盐钠盐） 0.25g
混合、溶于500ml蒸馏水中。

B液：CuSO4·5H2O 0.5g
H2O 100.00ml
用前将A液50份与B液1份混合即为试剂甲。

试剂乙：
于磨口回流瓶加入下列试剂
Na2WO4·2H2O 100.00g
NaMoO4·2H2O 25.00g
H2O 700.00ml
85％H3PO4 50.00ml
浓HCl 100.00ml
按上回流冷凝管以小火回流10h后再加：
硫酸锂 150.00g
H2O 50.00ml
溴水 数滴
开口继续沸腾15min，驱除过量的溴，冷却后溶液呈黄色微带绿色（如仍呈绿色，须重复滴加液体溴步骤）。稀释至1L，过滤，滤液置于棕色瓶保存。使用时用标准NaOH液滴定，以酚酞为指示剂，然后适当稀释（加水约1倍）使最终浓度为1mol/L。

另外，如果money没有问题的话，可以直接买Sigma公司的Folin-酚试剂，有点贵。

标准曲线的制备
⑴ 取标准牛血清白蛋白2.50mg，溶于10ml蒸馏水中，使成250μg/ml。

⑵ 按表8-2稀释。

表8-2 标准曲线稀释方法
成分 试 管 号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
牛血清白蛋白标准品（ml） 0 0.2 0.2 0.4 0.1 0.6 0.6 0.8 0.8 1.0 1.0
生理盐水（ml） 1.0 0.8 0.8 0.6 0.6 0.4 0.4 0.2 0.2 0 0
蛋白含量(μg／ml) 0 50 50 100 100 150 150 200 200 250 250

⑶ 每管加试剂甲5ml，混合后室温放置10min，再加0.50ml试剂乙（即Folin酚试剂），立即摇匀（否则显色降低）。

⑷ 30min后测OD650nm。

⑸ 以OD为纵坐标，蛋白含量为横坐标，绘制标准曲线。

样品测定
⑴ 待测样品1ml（适当稀释至约含25μg－250μg/ml）。

⑵ 加试剂甲、乙。

⑶ 比色、测OD650值。

⑷ 查标准曲线，求蛋白含量乘以稀释倍数，即为样品的蛋白含量。