孕酮的放射免疫测定法

孕酮的放射免疫测定法很敏感，但由于孕酮是半抗原，须先同牛血清白蛋白结合，才能注射于家兔，使之产生抗体。牛血清白蛋白结合在孕酮上的不完全部位对抗血清的特异性有很大关系，若结合在C3抗血清无特异性，结合在C6则特异性高，结合在Cll特异性更好。孕酮试剂盒已广泛应用于临床，介绍如下。

一、基本原理

此法采用双抗体放射免疫法：

Ag※+Ab+Abl一(Ag※Abl)+(AgAbI)+Ag※

含孕酮的病人标本及125碘标记的孕酮衍生物一起与定量的兔抗人孕酮抗体反应，形成抗原抗体复合物。

(AgAbl)+(Ag※Abl)+Ab2一(AgAbl)Abl+(Ag※Abl)Ab2

待抗原抗体反应平衡后，加入驴抗兔免疫球蛋白及PEG使游离部分与结合部分分离，离心后，用γ一计数器测量沉淀部分的放射性强度。

二、液相试剂盒的组成及操作步骤

（1）125碘孕酮标记物：一瓶，含放射性强度<10uci的125碘标记孕酮衍生物；磷酸盐缓冲液和0．1%叠氮钠；2～8℃保存，有效期内稳定。

（2）孕酮抗体：一瓶，磷酸盐缓冲液中含兔孕酮血清和0．1%叠氯钠；2～8℃保存，有效期内稳定。

（3）孕酮标记物：8瓶，浓度分别为0、0．1、0．5、2、10、30、100ng/ml的血清及0．1%叠氮钠；2～8℃保存至少6周内稳定，一20℃保存，有效期内稳定。

（4）质控血清：2瓶，分别为低、高浓度的血清和0．1%叠氮纳；2～8℃保存至少6周内稳定，一20℃保存，有效期内稳定。

（5）PEG一第二抗体：含PEG和驴抗兔血清和0．1%叠氮钠，2－8℃保存，有效期内稳定。液相试剂盒操作步骤：先在塑料管上编号，然后按表4—11程序进行操作。

三、固相试剂盒组成及操作步骤

二抗包被管：25/50/100T，4℃保存，注意防潮，有效期内稳定。

四、注意事项

（1）血清标本2～8℃保存不得超过1周，否则放一20℃保存。、但应避免反复冻融。病人在实验期间不得接受放射治疗或体内同位素检查。

（2）离心可用1000g，但至少需30～40分钟。

（3）弃上清注意不要丢失沉淀，否则明显影响结果。

（4）若待测样品浓度超过100ng/ml。应先用0标准稀释后重作。

（5）本实验使用放射性同位素，故一切操作和处理均应按放射免疫操作的规定进行。

（6）关于固相试剂盒在已知的大部分情况下，对于分离反应液的操作，既可采用负压吸引器反复洗涤两次；在有安全可靠的废液回收装置时，也可每管均匀加入不少于1ml蒸馏水，摇动后将液体倒出，并在吸水纸上略置一会，若有较大液滴应轻扣数次；测量前擦试试管口，以免污染计数井。

（7）不同批号的试剂不可混用，每份标本应做双管重复。

五、结果计算

（1）测每份标本管的cpm值并计算出平均数。

（2）按下列式计算各标准管，质控和病人标本的B/130%

B/Bo=(B-NSB)/(Bo-NSB)×100%

B=每双管计数率的均值，BO=O标准双管计数率的均值。

NSB=非特异性结合双管计数率的均值。

（3）以各标准管B/130为纵轴，标准物浓度(ng/m1)为横轴在logit—log坐标纸上绘制标准曲线。

（4）在标准曲线上查出质控血清及各标本的孕酮浓度。

（5）在自动7计数器上按预先编制程序，即可打印出标准曲线：的有关参数和待测物的浓度。

六、影响因素

（1）在月经周期中和妊娠以后，孕酮在血中浓度的变化很大这点应注意。

（2）放射治疗和体内核医学实验可对放免实验产生影响。

上述情况在解释结果时应慎重考虑，故最后诊断应由医生在全面评价病人的临床和实验室检查结果后作出。

七、正常参考值

月经周期中，孕酮浓度变化很大，在滤泡期血中孕酮浓度的波动很小，但在LH高峰开始时，血清中孕酮即可轻度升高，排卵后血中孕酮水平明显上升，妊娠足月时，每日胎盘可分泌孕酮达250mg或更多，循环中孕酮浓度可高达150～200ng/ml，所以每个实验室都应根据本实验室的条件和接触的人群建立自己的正常值范围，下列数据可供参考：