植物病原细菌及其所致病害症状观察

一、实验目的

细菌是引起植物病害的又一类重要的病原生物，虽不象植物病原真菌种类那样繁多，但因其个体微小，形态差异不够明显，所致病害症状复杂，都给细菌病害的研究带来一定的困难，病原细菌的形态观察和分类鉴定需要特有的实验技术，通过本次实验，掌握植物细菌病害的分类鉴定需要特有的实验技术，熟悉植物细菌病害症状类型和病原细菌的基本形态，学习植物细菌病害简易诊断方法及病原细菌初步鉴定的程序和技术，为以后植物细菌病害的正确诊断和病原细菌的分类鉴定打下良好的基础。

二、内容、材料和方法

（一）植物细菌病害的症状观察

植物细菌病害的症状常作为鉴定属的一种辅助性状，即症状类型和病原属之间有一定的相关性，如棒杆菌属的细菌主要引起萎蔫症状；假单胞杆菌属主要引起叶斑，腐烂和萎蔫症状；黄单胞杆菌属主要引起叶斑和叶枯症状；野杆菌属引起瘤肿等增生性症状；欧氏菌属一般引起软腐，有时也引起萎蔫。

此外，多数细菌病害在发病初期，特别在潮湿的自然条件下常呈水浸状或油渍状；在饱和湿度下病斑上常有菌脓形成，干后成为菌痂，掌握症状类型(附1)及其形成的生态条件，对细菌病害的正确诊断是十分重要的。观察下列病害标本，区分症状类型。

水稻白叶枯病(Xanthomonas oryzae)

棉花细菌角斑病(X.malvacearum)

马铃薯环腐病(Clavibacter sepedonicum)

白菜软腐病(Erwinia carotovora)

黄瓜细菌角斑病(Pseudomonas lachrymans)

苹果根癌病(Agrobacterium tumefaciens)

大豆细菌性斑点病(P.glycinea)

挑细菌性穿孔病(X.pruni)

菜豆细菌性叶烧病(X.phaseoli)

水稻条斑病(X.oryzicola)

（二）植物细菌病害的简易诊断

植物细菌病害的诊断和病原鉴定是比较复杂的，初步诊断是根据症状特点和显微镜检查病组织中的细菌来完成的，细菌病害，除少数(如苹果根癌病)外，绝大多数能在受害部位的维管束或薄壁细胞组织中产生大量的细菌，并且吸水后形成菌溢，因此，镜检病组织中有无细菌的大量存在(菌溢的出现)是诊断细菌病害简单易行的方法。

取水稻白叶枯病新病叶，在病斑病健交界处剪取2×2 mm的小块病组织，放在载玻片上，滴加一滴蒸馏水，盖好盖玻片后，立即在显微镜下观察，注意叶组织维管束剪断处是否有大量的细菌，呈云雾状溢出，如将视野调暗观察更易见到，按同样方法用健康组织作镜检反证。

（三）植物病原细菌形态观察和种类鉴定

细菌个体很小，无论形态观察还是种类鉴定，都须经染色后才能在显微镜下观察清楚，植物病原细菌目前发现的只有五个属：属的鉴定主要根据革兰氏染色反应，鞭毛数目和着生位置，菌落颜色及所致病害症状等进行。

1. 培养性状观察

取培养皿中培养的水稻白叶枯病菌(X.oyzae)、马铃薯环腐病菌(C.sepedonicum)，茄青枯病菌(Burkholderia solanacearum)和白菜软腐病菌(E.carotovora)等，注意观察菌落颜色、大小、质地，是否产生荧光色素等，和植物病原真菌培养菌落有什么根本性的不同?