接合菌基本形态及所致病害观察

一、实验目的

接合菌亚门的真菌叫接合菌，也是真菌中比较低等的一类，这类真菌的营养体为无隔菌丝体，无性繁殖产生孢囊孢子，有性繁殖产生接合孢子，接合菌分两个纲：接合菌纲(Zygomtcetes)和毛菌纲(Trichomycetes)。

与农业病害关系较大的是接合菌纲中的毛霉目(Mucorales)真菌，重要的有两个属：根霉属(Rhizopus)和毛霉属(Mucor)。本实验的目的是熟悉与植病关系密切的接合菌的形态及其所致病害的症状特点，同时观察真菌的异宗配合现象。

二、内容、材料和方法

毛霉目(Mucorales)真菌大多是腐生菌，引起植物花、果实、块根和块茎的腐烂。

1. 根霉属(Rhizopus)

菌丝发达，有分枝，分布在基物表面或其内，有匍匐丝和假根。孢囊梗2-3根丛生，在假根相反方向从菌丝上产生，一般不分枝，顶生孢子囊，产生大量孢囊孢子，有囊轴，锣锤形，孢囊孢子单胞，表面有饰纹，接合孢子色深，表面有瘤状突起。
取甘薯软腐病(R.nigricans)标本，观察症状特点，注意受害甘薯表面是否有白色毛状物生出?在白色毛状物中是否有黑点?挑取培养皿中培养的根足霉(带少许培养基)制片)，镜检小黑点是什么器官?注意匍匐枝和假根的形态，孢囊梗着生的位置，能否见到囊轴?什么形状?

2. 毛霉属(Mucor)

无匍匐丝与假根，孢囊梗单生，直立，其它形态同根霉，挑取培养皿中培养的毛霉制片(或取制备片020)，镜检孢囊梗，孢子囊和孢囊孢子，注意和根霉的区别。

3. 笄霉属(Choanephora)

形成的大小两种类型的孢子囊，条件不适时，产生大型孢子囊，大型孢子囊产生在顶端弯曲的孢囊梗上，其内产生多数孢囊孢子，孢子顶端有数根细毛。通常形成小型孢子囊，小型孢子囊聚生在孢子囊梗顶端膨大的头状体的小梗上，其中形成一个孢子，故也称这种小型孢子囊为分生孢子。

该菌为害花和果实，引起花腐和果腐，取制备片024，镜检笄霉的孢囊梗和孢子囊形态，注意观察该属与根霉、毛霉的区别。

4. 犁头霉属(Absidia)

产生匍匐丝和假根，孢囊梗自假根间的弓形匍匐丝上长出，配囊柄上长出附属丝包围接合孢子。取制备片023镜检犁头霉的假根，匍匐 丝及配囊柄上长出附属丝包围接合孢子的形态，注意孢囊梗着生的位置和根霉有何不同。

5. 毛霉目真菌异宗配合现象观察

毛霉目真菌多具异宗配合现象，即当两个不同交配型的菌株(“+”菌株和“-”菌株)相遇时，则从各自菌丝上产生称作原配子囊的分枝，两个原配子囊接触后，各自产生一个隔膜，将原配子囊分成两个细胞，顶端的细胞称作配子囊，基部的细胞称配囊柄，“+”和“-”两个配子囊接触点的细胞壁消解，融合成一个细胞，以后发育成黑色，厚壁的接合孢子。

每组取三个灭菌培养皿，分别将熔化的马铃薯洋菜培养基10毫升，在无菌操作下倒入培养皿中，凝固后翻转培养皿，用玻璃笔在皿底外面划一直径，第一皿直径两侧底内接种“+”菌株，第二皿两侧都接种“-”菌株，第三皿，一侧接种“+”菌株，另一侧接种“-”菌株，接种后，在25℃温箱中培养一周，观察两个菌落生长的交界处，有无黑色粒点，即接合孢子的形成，挑取菌落少许制片镜检。观察接合孢子的形态，注意接合孢子形成的过程，三个培养皿中哪个处理能产生接合孢子?为什么?