MMP-2和MMP-9的RT-PCR经验

ouyangty247：战友们有没有人正在做MMP-2和MMP-9的RT-PCR的？

我正在做，做得头都大了还没做出来，还请多多交流！

丁香园网友clearair00认为：

有什么问题能说的具体一些吗？大家帮你一起讨论，顺便也可以让后做类似实验的园友们少走些弯路，一举多得，岂不快哉！

丁香园网友ouyangty247认为：

我是从文献上直接查的引物，cDNA合成的GAPDH能出来，条带还挺宽挺亮，但MMP-2的电泳条带有时候很清晰，有时候却没有或者特别淡。MMP-9就没怎么出来过，今天就出来了一条特别淡特别细的，还不知道是不是。温度从52度到62度都试过，电泳时的上样量也增大到了11μl，还是不行。

丁香园网友clearair00认为：

既然“...GAPDH能出来，条带还挺宽挺亮，....MMP-2的电泳条带有时候很清晰....”，则提示RNA提取和cDNA转录过程都没问题，而且你的MMP-9也跑出了一条特别细的带，至于是不是你的目的条带，可以参考分子量标准初步判断出来。

1.假使当前出现的就是你的目的条带，那么造成其表达量低的原因可能是该基因在当前组织中的表达量本身就不高（不知可否有文献支持）所致。建议找一该基因表达丰度高的组织/细胞，行RT-PCT检测排除实验操作和试剂等的问题。

2.假使当前出现的不是你的目的条带，结合你的其他实验结果，很可能是你的引物设计有问题或失效，建议重新比对或设计合适、有效的引物。对引物的有效性的验证同样可用1法中的阳性对照组。

希望有帮助。祝实验顺利！