血糖的测定及激素对血糖浓度的影响

I . 邻甲苯胺法（O-T法）

【基本原理】

葡萄糖的醛基与邻甲苯胺在热醋酸溶液中缩合成葡萄糖基胺，再脱水生成希夫氏（Schiff）碱，然后经分子重排，生成一组蓝绿色化合物，在630nm处有一吸收峰，吸光度大小与血糖浓度成正比。

【器材】

水浴箱、 试管、分光光度计。

【 试剂 】

1．邻甲苯胺 试剂 取冰醋酸（AR）940ml,加入硫脲（AR）1.5g，溶解后加入邻甲苯胺60 ml混匀，置棕色瓶中，室温保存。新配试剂应放置24小时后（待老化）使用。此试剂腐蚀性极强，应避免与皮肤接触而造成灼伤。

2．12mmol/L苯甲酸溶液 称取苯甲酸1.4g，加入蒸馏水900ml,加热助溶，冷却后加蒸馏水至1000ml。

3．葡萄糖标准贮存液（100mmol/L） 准确称取无水葡萄糖（预先置80℃烤箱中干燥至恒重，移置干燥器中保存）1.802g,用12mmol/L苯甲酸溶液溶解，移至100ml容量瓶中，再以12mmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度，摇匀，移入棕色瓶中，冰箱内保存。

【操作步骤】

混匀，置沸 水浴 中煮沸12分钟，取出置流水中冷却5分钟用分光光度计波长630nm，以空白调零，读取各管吸光度。

[注]

1．邻甲苯胺与葡萄糖的反应并非特异 ，其他糖在反应中亦能产生与葡萄糖相似的吸收光谱，它们的相对吸光度比率分别为：葡萄糖=1.00;果糖=0.06;甘露糖=0.96;半乳糖=1.42;蔗糖=0.16。但这些糖中只有葡萄糖、果糖、半乳糖存在于正常人血清中，而后两者在正常人血液中含量甚微，不影响试剂测定结果。

2．葡萄糖与邻甲苯胺的呈色强度与反应条件（邻甲苯胺和冰醋酸的批号、试剂配制后保存的时间以及加热温度和时间）有关。因此，各管的反应条件必须完全一致。

3．邻甲苯胺为浅黄色油状液体，易被氧化成红棕色，用此种邻甲苯胺配制的试剂、空白管颜色深，反应灵敏度低，严重影响测定结果。须经以下方法处理方可应用：在500ml邻甲苯胺中加入盐酸羟胺0.5g,置50～60℃ 水浴 中20分钟并不时摇动，使邻甲苯胺还原，颜色变浅。如上述处理不够理想，则将邻甲苯胺用全玻璃 蒸馏 器重 蒸馏 ，收集199～201℃无色或浅黄色的流出液，置棕色瓶加黑纸袋避光密封保存。

II. 胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响

【基本原理】

人和动物体内，血糖浓度受各种激素调节而维持恒定。胰岛素能降低血糖；其他很多激素则具有升高血糖的作用，其中以肾上腺素作用较为迅速而明显。胰岛素促进肝脏和肌肉将葡萄糖合成糖元，又加强糖的氧化作用，故可以降低血糖；肾上腺素促进肝糖元分解而增高血糖。

此实验观察家兔注射胰岛素和肾上腺素前后的血糖浓度变化。

【器材】

注射器 、针头、刀片、 分光光度计 。

【试剂】

1．肾上腺素和胰岛素

2．草酸钠

3．25%葡萄糖

【基本操作】

1．动物准备

取正常家兔两只，实验前预先饥饿，称体重（一般为2～3kg）。

2．取血

一般多以耳缘静脉取血，先去毛，用二甲苯擦拭兔耳，使其血管充血，再用干棉球擦干，于放血部位涂一薄层凡士林，再用粗针头刺破静脉放血，将血液收入抗凝管中（每ml血约需2mg草酸钠）边收集边摇匀，以防凝固。用干棉球压迫血管止血。

3．注射激素后取血

取饿兔血后，其中一只兔皮下注射胰岛素，剂量按0.75单位/公斤体重计算，并记录注射时间。一小时后再取血。取血后立即腹腔或皮下注射25%葡萄糖液10ml，以免家兔发生胰岛素性休克而死亡。

另一只兔皮下注射肾上腺素，剂量按0.4mg/公斤体重计算，并记录注射时间。半小时后再取血。

[计算]

算出注射胰岛素后血糖降低和注射肾上腺素后血糖增高的百分率。

测血糖常用化学法有邻甲苯酚法,常用酶法为葡萄糖氧化酶法、己糖 激酶 法。