一种快速提取细菌和酵母染色体DNA的方法

快速获取微生物基因组DNA在基因克隆、重组子的筛选以及分类学中十分必需。来自ABGENT的技术人员向您介绍一种简易快速提取细菌（含革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌）和酵母染色体DNA的方法。采用本法所提染色体DNA，可直接应用于常规的分子生物学实验，包括PCR、限制性内切酶的切割，以及基因组文库的构建。

1、 取1ml过夜培养菌液于8000g，离心2min。去除培养基后，用400ul STE缓冲液（100mM NaCl，10mM Tris/HCl，1mM EDTA，pH8.0）重悬菌体，按相同条件离心清洗菌体两次。

2、 收集的菌体用200ul TE缓冲液（10mM Tris/HCl，1mM EDTA，pH8.0）悬起后加约50mg 直径425-600um 规格的玻璃珠，再加入100ul Tirs饱和苯酚。

3、 上述混合液在漩涡振荡器上振荡（细菌，振荡60s；酵母，振荡120s-200s），随后于4℃，13000g，离心5min。

4、 吸取上层水相（约160ul）转移至一个新的离心管中，加TE缓冲液补至200ul，再加入100ul氯仿混匀后，于4℃，13000g，离心5min。重复此步两到三次。

5、 转移上层水相（约160ul）至一个新的离心管中，补加40ul TE和5ul RNase（10mg/ml），37℃消化10min。

6、 加入100ul 氯仿混匀于4℃，13000g，离心5min。

7、 转移上层水相（约150ul）至一个新的离心管中。

8、 至此，上层水相即含有纯化好的基因组DNA，可直接用于随后的常规分子生物学实验。