杂交瘤细胞株稳定性的检查

在液氮中保存的细胞株及体外传代培养的细胞株，都需要定期检查染色体数和抗体产生能力，因有些杂交瘤细胞会逐渐丢失染色体，使产生抗体的能力丧失或减弱。此时需及时进行克隆化，保留稳定分泌抗体的细胞株。

一、杂交瘤细胞染色体检查

材料和试剂

1. 秋水仙素。

2. 甲醇，冰醋酸。

3. Giemsa染液，玻片。

操作步骤

1. 取传代培养24h的细胞，加0.1ml秋水仙素，放37℃水浴4h。

2. 收集细胞2000r/min×10min离心弃上清，沉淀中加入0.075mol/L KCL 10ml，用滴管吹吸均匀，放37℃水浴15～20min，使细胞肿胀。

3. 离心弃上清后，沉淀细胞用甲醇3份、冰醋酸1份的混合液10ml固定20min。

4. 2000r/min离心10min，弃上清后取沉淀细胞涂片，自然干燥。

5. 用Giemsa染色，油镜检查。小鼠脾脏B细胞染色体约40条，SP2/0细胞染色体68条，杂交瘤细胞染色体100条左右。

二、McAb产生能力检查

取冻存复苏传代培养的杂交瘤细胞培养上清或诱生小鼠腹水，检测其抗体效价，特异性及亲和力，一旦发现杂交瘤细胞产生抗体能力减弱，应及时进行克隆化，保留稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株。