原代培养的成骨细胞、骨髓基质细胞、cos7细胞的传代
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我曾经做过原代培养的成骨细胞传代和骨髓基质细胞以及cos7细胞的传代。基本的操作过程都是:
倒掉或者吸掉培养基
37度预温的PBS洗涤细胞3次
加入浓度为0.1%的胰酶和0.05%EDTA进行消化,添加的量看所用的培养瓶大小,可以在室温下消化,也可以在37度进行消化
在显微镜下观察,等细胞成片脱离时,加入3毫升含血清培养基中止消化
将细胞悬液转移到离心管中1000rpm离心5分钟收集细胞
弃上清,再加入5毫升含血清培养基重悬细胞,再同样转速和时间离心一次
弃上清,根据实际需要添加适量培养基重悬细胞接种-->37度,5%二氧化碳静置培养。
我的感觉消化时应把握的原则是:胰酶的浓度不要太高,消化时间可以适当延长,这样可以保证达到满意的消化效果。消化时可以在室温下进行并同时在显微镜下观察,看消化的情况决定何时中止消化。而且在室温下消化可以比在37度下消化速度更慢一些,更容易掌握。