红豆杉提取液的过滤

红豆杉（Taxus）又名紫杉，也称赤柏松，生于海拔1000～1200m处的山地，是世界上公认的濒临灭绝天然珍稀植物，从其根、皮、茎、叶中提取的紫杉醇（taxol）是目前世界上最有效的抗癌药物之一。全球每年大约需要1500～2500kg紫杉醇，而1kg树皮仅能提取50～100mg。

10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ（又称10-脱乙酰基浆果赤霉素Ⅲ，10-deacetylbaccatinⅢ，10-DABⅢ）为有抑制肿瘤作用的紫杉烷二萜类化合物。

Bissery等报道，可利用10-DABⅢ合成具有比紫杉醇更高抗癌活性的多烯他赛（docetaxel）。紫杉醇主要存在于树杆和树皮中，10-DABⅢ主要存在于树叶中，其含量大大高于紫杉醇的含量。

红豆杉是国家珍稀保护植物，生长缓慢，如果直接从红豆杉树皮中提取紫杉醇，不仅资源有限，而且不利于资源保护。

以10-DABⅢ为原料采用酶催化半合成工艺方法来制备紫杉醇，可大大简化合成过程，使紫杉醇骨架修饰所需步骤更少，操作更简单，提高了紫杉醇合成的选择性和生产率，进而为在更大规模上进行紫杉醇生产提供了技术支持，最终使紫杉醇的化学合成（半合成）的产业化有了实现的可能。

目前文献报道从各种紫杉植物中提取紫杉醇的方法，均需经过繁冗的分离过程。本实验采用了一种适合于以各种紫杉植物树叶或树枝做原料，通过极性梯度溶剂萃取的方法逐步脱除大量不相干杂质，得到合成紫杉醇的前体10-DABⅢ的方法，然后通过反相层析柱加成，即可获得抗癌活性成分紫杉醇；

材料与方法

1、材料与仪器

南方红豆杉（Taxus mairei）枝叶取自浙江宁海红豆杉种植基地，8年树龄。10-DABⅢ对照品为Sigma公司产品，纯度98%；所用甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯、二氯甲烷、氯仿、正己烷、石油醚、乙腈等均为分析纯试剂。

JJ-1精密增力电动搅拌仪，江苏金坛市江南仪器厂；SENCO R-201旋转蒸发仪，上海申顺生物科技有限公司；玻璃硅胶柱为2cm×40cm，杭州常盛科教器具厂；UV-2802PC/PCS型分光光度计，UNICO（上海）仪器有限公司；Sigma-3K18低温离心机（4℃），转速18000r/min；LabAlliance高效液相色谱仪（美国SSI公司）。

2、实验方法

取南方红豆杉枝叶研磨成细粉，于燥保存。称取100g红豆杉细粉，45℃烘干，石油醚预处理，5L甲醇冷浸，辅以搅拌，超声40min，反复2次。

浸渍液过滤，减压浓缩至100mL。加入75ml正己烷萃取分液，重复操作2～3次。弃去正己烷层，萃余液旋干溶剂，制成浸膏。加入氯仿与水的混合液（1：1）反复提取。

氯仿层减压浓缩至10～15ml上柱，用硅胶正相色谱柱分离。分段收集洗脱液，紫外监测，收集有效段合并浓缩，在甲醇/水中重结晶。

3、分析测试方法

采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）方法检测。分析柱为Kromasil C18柱（250mm×4.6 mm，5μm），流动相为乙腈-水（30：70），流速为2.0ml/min，每次进样体积为10μl，进样间隙用纯乙腈对柱子进行梯度冲洗。

紫杉醇最大吸收波长为227nm，检测器测定波长为232nm，温度30℃，相关数据计算均采用峰面积归一化法。

结果

由于红豆杉枝叶中含有大量蜡质、植物色素诸如叶绿素等低极性杂质，故在提取前应首先加入低极性溶剂如正己烷、石油醚浸泡脱脂，以除去大量存在的此类非极性杂质，简化后续操作。该法可除去红豆杉枝叶中多达72%的极性比10-DABⅢ小且可溶于正己烷的杂质。