人类白细胞抗原分型技术

人类白细胞抗原（HLA）是分布在组织细胞表面的一组膜蛋白，它们的基本生物学功能是将抗原信息提呈给T细胞识别，从而启动和调节特异性免疫应答。根据分子结构、组织分布和生物学功能的差异，HLA抗原可以分为二类，即HLA-I类抗原（包括HLA-A、B、C）和HLA-II类抗原（HLA-DR、DQ、DP）。

HLA抗原由第六染色体短臂上一组紧密连锁的基因群编码。在群体中，HLA抗原及其编码基因均表现出高度的遗传多态性，HLA多态性的检测称为HLA分型（HLA typing）。HLA分型可用于器官或组织移植的组织配型、疾病遗传易感性的研究和法医学鉴定等方面。

最初的HLA分型技术是基于HLA抗原特异性的差异，包括HLA血清学分型技术和细胞学分型技术。从经产妇血清中筛选出HLA抗原特异性的抗血清（分型血清），作为抗体与待测淋巴细胞反应，在补体的作用下，与相应抗体结合的淋巴细胞发生死亡，从而判断待测标本的HLA抗原型别，这种分型方法称为HLA血清学分型技术，主要用于HLA-A、B、C、DR、DQ抗原的分型。

HLA细胞学分型技术是利用已知HLA型别的纯合子分型细胞（HTC）与待测淋巴细胞混合培养，当二种细胞的HLA型别存在差异时，淋巴细胞会发生增殖反应，据此判断待测标本的HLA型别，HLA细胞学分型技术用于HLA-D和HLA-DP抗原型别的鉴定。

基于上述HLA抗原特异性的分型方法存在明显缺点，主要是分型血清或分型细胞来源困难、操作繁琐、结果判断主观性大和误差较大、待测标本必须是活淋巴细胞等，影响了HLA分型的应用。

随着分子生物学的发展和人们对HLA基因的认识，HLA分型技术也由检测HLA抗原的特异性发展到检测HLA基因中碱基排列顺序的差异，后者称为HLA的DNA分型技术。相对而言，DNA分型技术具有分型试剂易于标准化、操作简单、结果准确性高和标本要求低等优点。

目前广泛使用的DNA分型技术基本上是建立在PCR技术的基础上，常用的方法包括PCR-SSO（序列特异性寡核苷酸探针杂交法）、PCR-RFLP（限制性片段长度多态性检测法）、PCR-SSP（序列特异性引物扩增法）、PCR-SSCP（单链构像多态性分析法）等。DNA分型技术最初用于HLA-II类（DR、DQ、DP）分型，目前HLA-I类和HLA-II类均可以用DNA分型技术进行分型。

由于抗原的特异性取决于其氨基酸的组成和顺序，而后者的差异是由于其编码基因中碱基排列顺序不同所致，HLA-I类基因的差异主要集中在第2、3外显子，HLA-II类基因的差异主要集中在编码β链基因的第2外显子。

HLA的DNA分型方法是依据这种原理，通过检测各种HLA等位基因序列的差异，来判断待测标本的HLA型别。鉴于目前HLA分型技术发展的趋势和实用性，本章介绍DNA分型方法的PCR-SSO、PCR-RFLP和PCR-SSP技术。

这些分型方法的基础是PCR，有关PCR的操作过程和注意事项请参阅本书第五章或其他资料；有关HLA各个基因座位分型时使用的引物、探针、限制性核酸内切酶以及国际组织相容性协作会议（IHWC）所推荐的分型方法可以参照有关网址。