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电子显微镜的使用与细胞超微结构观察

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一、 实验目的

(1) 了解透射 电子显微镜 的主要结构、功能与基本工作原理;

(2) 了解扫描 电子显微镜 的主要结构、性能与基本工作原理。

二、 实验步骤(讲解演示)

1)透射电镜样品超薄切片常规制作规程

1.取材:根据实验目的取材,要求部位准确,体积小于2mm3

2.醛类固定:用2%-3%的戊二醛固定2小时;

3.清洗:用磷酸 缓冲液 清洗3次,每次10min;

4.锇酸固定:用1%-2%的锇酸固定2~3小时;

5.清洗:用磷酸 缓冲液 清洗3次,每次10 min;

6.脱水:用50%、70%、80%、90%乙醇梯度脱水各15min,再用100%乙醇脱水3次,每次30min;

7.置换:用环氧丙烷或丙酮置换3次,每次30min;

8.浸渍:10hr以上,浸渍过程如下:

①丙酮:包埋剂=3:1的浸渍液浸渍(动物样品1hr,植物样品2~3hr);

②丙酮:包埋剂=1:1的浸渍液浸渍(动物样品1hr,植物样品2~3hr);

③丙酮:包埋剂=1:3的浸渍液浸渍(动物样品4hr,植物样品12~24hr);

④纯包埋剂浸渍(动物样品4hr,植物样品12~24hr);

9.包埋:将样品放入盛有纯包埋剂的包埋板中;

包埋剂配方中Epon812,MNA,DDSA,DMP-30的比例见附表

10. 聚合:将包埋板置于40C、60℃条件下各聚合48hr;

11.修块:将包埋头修成梯形,且样品表面积小于0.2mm×0.2mm

12.超薄切片:切片厚度50-90nm

13.染色:铀染色 5~15min 清洗

铅染色 5~10min 清洗

2)扫描电镜样品常规制备规程

1.取材:根据实验目的取材,要求部位准确

2.清洗:用磷酸缓冲液反复清洗样品表面的灰尘、杂质等附着物

3.固定:用2%-3%的戊二醛固定2小时

4.清洗:用磷酸缓冲液清洗3次,每次10 min

5.脱水:用50%、70%、80%、90%乙醇梯度脱水各15min,再用100%乙醇脱水3次,每次30min;

6.置换:用叔丁醇置换3次,每次30min

7.干燥:用冷冻干燥仪干燥样品

8.粘样:用双面胶带将样品粘到样品台上

9.镀膜:用离子溅射仪给样品镀10nm金膜

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