重症急性胰腺炎动物模型制备标准操作规程(SOP)

名称：重症急性胰腺炎动物模型制备

关键词：重症急性胰腺炎

目的：制作重症急性胰腺炎动物模型

背景知识：这是我师兄的课题中的部分，技术很成熟

原理：SAP的发病机理复杂，主要有胰酶异常激活、白细胞过度激活、胰腺微循环紊乱等学说，在造成胰腺损伤的同时。

激活胰腺内的炎症细胞使其释放炎症介质，这些炎症介质逸入血液循环激活机体其他炎症细胞，释放大量的炎症介质，引起瀑布反应(cascade)，促成全身炎症反应综合征状态（systemic inflammatory response syndrome, SIRS）和多器官功能衰竭。

主体内容：

1. 动物术前准备和麻醉

所有大鼠在模型制备前均在实验室用普通鼠料饲养两周，以适应环境。术前均禁食12h，自由进水。各组大鼠均用戊巴比妥钠30mg/kg，腹腔内注射麻醉，成功后用一小塑料通气管放置口咽，以防气道窒息，腹部去毛，平卧固定，碘伏消毒颈部、腹部和腹股沟区。

2.制作动物模型

取上腹部正中切口1.5cm，进腹后，对照组：仅翻动十二指肠并触摸胰腺数次。

SAP组和各药物治疗组：制作模型参照Aho等介绍的方法并加以改进，沿幽门寻找十二指肠，将其提至切口外，暴露胰胆管进入十二指肠处即十二指肠乳状，在肠壁对系膜缘，将针尖端磨钝的5号针穿刺入十二指肠肠腔内，经其乳状开口进入胰胆管约0.5cm。

同时近肝门处用无损伤小动脉夹夹闭胰胆管，防止行胰管注射液体向肝脏反流，由微量泵控制，恒压恒速下，注入新鲜配制的5%牛磺胆酸钠1.5ml/kg，注射速度为12ml/h，完毕后，抽出针头。

小动脉夹夹闭近乳状胰胆管5min，确定胰腺出现肉眼可见的水肿、出血变化后，去除动脉夹，用无损伤线修补十二指肠穿刺口的浆肌层。待确认腹腔动脉导管位置妥当后，缝合切口并包扎。

3 .导管的放置

静脉置管：在麻醉后制模前，经右侧颈内静脉切开插入一根PE50聚乙烯导管作为静脉输液。

动脉置管：在制模后关腹前，经右侧股动脉将一根PE10聚乙烯导管逆行插入腹主动脉，使导管末端至腹腔干动脉开口处，用Evans 0.2ml注入导管内，立即观察胰腺血管是否染色，以确认导管位置深度，实验完毕行解剖再次证实导管位置。所有导管通过皮下从肩胛下穿出固定导管，并用一根约30cm长绳固定大鼠，允许其自由活动。