双向电泳常见问题解答

1. 出现垂直拖尾是什么原因？

答：有可能是蛋白没有被SDS充分包裹，适当延长平衡时间可以解决这个问题；另外也有可能是多余的DTT或者灰尘所致。

2. 为什么出现横向条纹？

答：有可能是聚焦不完全，需要根据胶条长度和PH范围以及上样量选择合适的聚焦时间；另外也有可能是样品提取及溶解和水化不完全的缘故，更改样品提取方法及充分水化溶解可以解决该问题。

3. 为什么电压上不去？

答：主要是样品离子含量过高，通过适当修改提取方法及采用滤膜过滤、丙酮沉淀等方法可以获得较好的效果，另外，也可以通过缓慢上升电压来部分解决该问题。

4. 为什么点比较少？

答：主要原因包括蛋白上样量过少，或者染色液失效或者配置错误；另外也有可能是蛋白没有充分进入IPG胶条以及IPG 胶条和 SDS 胶之间结合不好等原因引起的。

5. 为什么出现重影？

答：主要是胶条的支持膜没有和玻璃板充分贴合好，操作的时候注意观察一下就可以了。

6. 为什么凝胶背景很深？

答：有可能是电泳缓冲液不干净，特别是银染的时候；另外，银染的过程中清洗不充分也会加深凝胶的背景。