实验80 切除卵巢及注射雌激素对大白鼠动情周期的影响

切除卵巢及注射雌激素对大白鼠动情周期的影响

　　【目的要求】

　　通过对大白鼠阴道涂片的观察，了解性周期中阴道上皮细胞的变化。

　　【基本原理】

　　在周期性排卵的动物，伴随着性周期可见到生殖器官和附属生殖器官的变化。通常通过大白鼠的阴道涂片法，来观察性周期中阴道上皮细胞的变化，进而了解在性周期各个时期中卵巢的活动与性激素的变动。

　　大白鼠的性周期中，各个时期阴道分泌物涂片的镜象。

　　1．动情前期阴道分泌中，大部分是膨大而略呈圆形的有核上皮细胞，少量角化细胞，不含白细胞。

　　2．动情期角化细胞很多，集合成块。

　　3．动情后期多量的白细胞及少量角化细胞。

　　4．动情间期（非发情期）可见少量上皮细胞。

　　根据涂片观察所得结果，对照以上特征，即可判断大鼠进入性周期的哪一动情期阶段。

　　【动物与器材】

　　雌性成熟大白鼠（或小白鼠）6只、玻片、常用手术器械、显微镜、吸管、盖玻片、生理盐水、乙醚、己烯雌酚、瑞特氏染料。

　　【方法与步骤】

　　1．取雌性成年未孕大白鼠6只，分成三组：第一组为对照组；第二组为去卵巢组；第三组为去卵巢注射己烯雌酚组。

　　2．取清洁玻片3块，按上述分组作好记号，然后各滴入一滴生理盐水。

　　3．用吸有生理盐水的吸管吸取阴道分泌物，然后涂到玻片上，盖上盖玻片，不染色即可进行观察。如待涂片干后，用瑞特氏染料染色3—5min，则细胞核被染色，细胞的形态更易辨认。

　　4．用显微镜检定涂片，并判定属于动情周期中的哪一期。

　　5．卵巢摘除法用乙醚将第二、三组大白鼠麻醉，腹位固定在手术台上，剪去腰部的被毛，用酒精消毒皮肤及手术器械。由距最后一根肋骨1cm的尾侧开始，在背部正中切开皮肤约1cm，从切口处向左、右分离皮肤。

在脊柱两侧腹壁剪开一切口，肌肉的下面就是被脂肪组织包裹的卵巢，用镊子把大白鼠的卵巢连脂肪组织轻轻移到腹腔外，用线将卵巢与输卵管连接处结扎，然后摘除卵巢。缝合腹壁及皮肤切口。第一组大白鼠不摘除卵巢，只行切开与缝合腹壁和皮肤手术。

　　6．约7—10d后检查各组大白鼠的阴道涂片。如去卵巢后大白鼠已进入动情间期，即给第三组大白鼠都皮下注射己烯雌酚25μg。

　　7．3d后再涂片检查各组大白鼠阴道分泌物，观察它们进入动情周期中的哪一期。

　　【注意事项】

　　1．去卵巢10d左右，大白鼠阴道涂片应停留于动情间期（非动情期）。如仍在其它时期，则应饲养数天后再观察，亦应考虑卵巢是否已切除。

　　2．手术后的大白鼠，最好分笼单独饲养。