药动学实验

药动学实验

药动学研究药物在生物体内的转运、代谢变化过程和药物浓度随时间变化的规律。其基本的过程是药物的吸收、分布、代谢、排泄。本实验包括三部分内容：

1．通过测定血、肝、脂肪组织中磺胺类药物浓度，以了解药物的吸收及分布；

2．通过测定正常及肾功能受损家兔血浆中PSP(酚磺酞)浓度分别求得PSP的血浆半衰期，以了解肾功能损害对药物消除的影响；

3．观察四氯化碳损伤小鼠肝功能对药物作用的影响以间接了解药物在体内经肝脏代谢的情况。通过实验初步了解药动学的研究方法。

一、药物在体内的分布

【目的】

观察小白鼠口服磺胺嘧啶（sodium sulfadiazine，SD-Na）后一定时间血液、肝脏、脂肪组织中药物的浓度，以了解药物在体内分布的情况。

【原理】

药物吸收后首先进入血液循环，以后继续通过各种屏障进入细胞间隙及细胞内液。药物在体内的分布多数是不均匀的，且处于动态平衡中，随药物的吸收与排泄不断变化。药理作用强度取决于药物在靶器官的浓度。了解药物在体内的分布有助于认识和掌握药物的作用和应用。

【预习要求】

1．预习药动学理论知识 见药理学教材相关章节。

2． 仪器 设备知识 Unico7200型数字式分光光度使用方法见第二章分析 仪器 及本实验附录2。

3．文献检索 检索相关研究论文。

4．预绘制实验原始数据记录表格和统计表格。

【材料】

体重25克以上雌性小鼠；80-2型离心机，组织匀浆器，7200型数字式分光光度仪或721分光光度计；酸式及碱式滴定管(供加 试剂 用)。150g/L磺胺嘧啶钠溶液，5%三氯醋酸溶液，5g/L麝香草酚溶液，5g/L亚硝酸钠溶液。

【方法】

1．测定血中SD浓度

（1）取小白鼠一只，用SD-Na溶液1.5g/kg(150g/L SD-Na, 0.1ml/10g) 灌胃，记录给药时间，于给药后45~60分钟剪断股动脉或取眼球放血，将血滴入含有肝素或枸橼酸钠的 离心管 中。

（2）取血0.2ml置另一试管内，加5%三氯醋酸溶液9.8ml，充分振荡后放置10分钟，过滤。

（3）取滤液6ml，加入5g/L亚硝酸钠溶液0.5ml，充分摇匀后再加入5g/L麝香草酚溶液(以200g/L 氢氧化钠溶液配制)1.0ml，摇匀，放置10分钟后，用7200型分光光度计测定(460nm波长)，记录所得光密度，从标准曲线查得磺胺嘧啶浓度，所得数即为血中SD-Na浓度。

2．测定肝、脂肪中磺胺嘧啶浓度

（1）小鼠放血后，打开腹腔取肝脏及脂肪组织(睾丸或卵巢附近处脂肪组织较多，此外两腹股沟处皮下亦有一定数量脂肪组织供取用)于培养皿中，肝脏和脂肪组织分别剪碎。

（2）秤取0.5克肝组织置于盛5%三氯醋酸溶液2.0ml之匀浆器中研碎，将匀浆倒入另一中试管，再加5%三氯醋酸2.0ml研磨一次，匀浆也倒入上述试管中，然后以5%三氯醋酸溶液洗涤匀浆器，溶液也倒入上述试管中，总容积达10ml为止，充分振摇，静置10分钟，过滤。

（3）取滤液6ml，加入5g/L亚硝酸钠溶液0.5ml,充分摇匀后再加入5g/L麝香草酚溶液1.0ml，摇匀后静置10分钟，用7200型分光光度计测定(460nm波长)，记录所得光密度，从标准曲线上查得磺胺嘧啶钠浓度，将此数值乘以2/5(因所取组织量为0.5g)即为肝中SD-Na浓度。

（4）依同法测定脂肪组织中SD-Na浓度。

3．标准曲线的制备：于一系列试管中，分别加入1g/L、0.8g/L 、0.6g/L、0.4g/L、0.2g/L 、0.1g/L、0.05 g/L的SD-Na溶液0.2ml，再分别加入5%三氯醋酸溶液9.8ml，摇匀，取6ml 再依次加入5g/L 亚硝酸钠溶液0.5ml，5g/L麝香草酚液1ml，摇匀后静置10分钟，以7200或721型分光光度计(460nm波长)，记录各管的光密度。以光密度为纵座标，SD-Na浓度(mg/100ml)为横座标，在座标纸上绘一标准曲线。

【观察项目】

测定血、肝和组织中的SD-Na浓度并将数据填入表7-3中。

表7-3.小鼠口服SD-Na后不同组织的含量比较

组织 SD浓度(mg/100ml) 血 肝 脂肪

【实验报告要求】

1．题目。

2．署名 作者和合作者姓名及单位

3．结构式摘要（目的，方法，结果，结论）。

4．材料和方法 主要实验材料，实验数据记录条件，观察指标，数据用`x±s表示，统计方法。

5．结果 合并全班数据，按表7-3要求填表，比较小鼠口服SD-Na后不同组织的含量。

6．讨论 根据实验结果，分析讨论药物SD-Na在体内分布的不均匀性，靶器官的浓度不均匀性对药理作用强度影响。

7．参考文献。

二、静脉注射苯酚磺酞的药动学参数计算

【目的】

了解药动学研究的方法学。通过给正常家兔和肾功能受损家兔静脉注射苯酚磺酞(Phenolsulfonphthalein，PSP)实验，观察PSP在体内随时间变化的代谢规律，学习药动学参数的计算方法，了解肾功能受损对药动学的影响。

【原理】

PSP 静脉注射后迅速分布全身，其血浆浓度与各组织器官的浓度之间保持动态平衡，此时整个机体可视作单一房式，即一室模型。在给药后不同时间取血测定血药浓度，依血药浓度与时间关系计算如下药动学参数。

1．血药浓度 血药浓度（C）随时间（t）变化的关系常用C-t曲线表示，0时刻的血药浓度用C0表示、t时刻的血药浓度用Ct表示等。

2．消除速率常数（k） 指单位时间内药物被消除的比率。PSP在体内的消除遵循一级动力学规律，血药消除速度与血浆药物浓度成正比：

【预习要求】

1．预习药动学理论知识 见药理学教材相关章节。

2．了解药动学研究的方法学

3．仪器设备知识 Unico7200型数字式分光光度使用方法见第二章分析仪器及本实验附录2。

4．文献检索 检索相关研究论文。

5．预绘制实验原始数据记录表格和统计表格。

【材料】

家兔两只； 离心机 ，7200数字型分光光度计；6g/L PSP溶液，60g/L升汞溶液，200g/L氨基甲酸乙酯或10g/L sodium pentobarbital，稀释液(0.9% NaCl 29ml+1N NaOH 1ml)，10g/L肝素钠。

【方法】

1．肾功能受损家兔 实验前48小时给家兔皮下注射60g/L升汞溶液0.2ml/kg，至实验开始时该兔的肾功能已受相当损害，此即肾功能受损兔。

2．取肾功能正常及肾功能受损的家兔各１只，称重后用200g/L氨基甲酸乙酯5ml/kg行静脉麻醉(1g/kg体重)，肾功能受损家兔麻药剂量减至2/3。兔麻醉后背位固定于兔板，切开颈部皮肤，分离肌层，暴露颈动脉，并游离约3~4cm长，结扎远心端，用动脉夹夹住近心端，在靠近结扎的部位用眼科手术剪在动脉壁上剪一“V”形小切口，插入动脉插管，结扎固定。取血时松开动脉夹即可。

3．从耳缘静脉注射10g/L肝钠素1ml/kg，在另一侧耳缘静脉注射6g/L PSP溶液(0.2ml/kg体重)。注射后第2、5、10、15、20、25分钟分别从颈动脉取血2ml（注意每次取血前应将导管内的陈血放去），置于刻度 试管 内，离心10分钟(2000转/分)后取血浆0.2ml，置于另一 试管 ，加稀释液3ml摇匀待测定。

4．PSP血浆浓度计算 以7200 分光光度计 在波长520nm处测定PSP含量。先用稀释液调零，然后测定稀释血浆的吸光度。将测到的吸光度乘以8.13(实验室已利用不同浓度的PSP标准液计算吸光度与PSP浓度的线性关系，得到吸光系数D=8.13)，再乘稀释倍数16，即为PSP的血浆浓度。

5．药动学参数计算

将不同时间点的PSP血浆浓度(C)记入表7-4，然后换算成1nCt 。将时间t作为x，1nCt作为y，用直线回归分析法可参考本书的第五章第四节Excel回归分析，亦可参考本实验附录1。求得截距（a=1nC0）及斜率（b=-k），再计算C0、k、t1/2、Vd和CL。

药动学参数计算方法：

1nCt =k×t + 1nC 0

C 0 (mg/ml)＝ln -1 a

k(min -1 )＝-b

t 1/2 (min)＝0.693/k

Vd(ml/kg)＝A(mg/kg)/C 0 (ml/L)

CL(ml/kg/min)＝k×Vd