关于SDS-PAGE凝胶电泳
SDS-PAGE凝胶电泳是在PAGE凝胶电泳中引进阴离子去污剂SDS，通过SDS打开分子内和分子间氢键，破坏蛋白质的二级和三级结构。
蛋白质在一定浓度的含有SDS的溶液中，与SDS分子按比例混合，形成SDS-蛋白质复合物，这种复合物由于结合了大量SDS，是蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块，从而降低或消除了各种蛋白质分子间天然的电荷差异。
由于SDS与蛋白质的结合是与蛋白质分子量成比例的，因此在进行电泳时，蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小。
SDS-PAGE凝胶的有效分离范围
分离胶浓度（%） 线性分离范围（KDa）
15 12-43
10 16-68
7.5 36-94
5.0 57-212
SDS-PAGE凝胶电泳常见问题分析
问题
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可能原因
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建议解决方法
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推荐电压条件下电泳时间过长
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电泳缓冲液过稀
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配制新鲜缓冲液，使用1×稀释液
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推荐电压条件下电流过高，热量过大
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电泳缓冲液过稀
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配制新鲜缓冲液，使用1×稀释液
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推荐电压条件下电流过低或无电流
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接触不良
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在电泳前移除胶盒底部的封条；确认缓冲液浸没过加样孔；检查buffer core上导线连接
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蛋白带型条状
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上样过量
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降低蛋白上样量
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样品中盐浓度过高
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通过透析或凝胶过滤降低样品中盐浓度
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样品沉淀
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加大样品中SDS的浓度
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样品中的污染，如脂类或DNA复合物
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离心或过滤样品以除去特定污染物
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制胶不佳
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确保灌胶均匀，一次完成
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条带模糊
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蛋白样品部分变性
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完全变性蛋白
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蛋白样品部分还原
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确保加入足够量的DTT
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电泳时间过长
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观察前面的指示剂染料，掌握恰当的电泳时间。
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哑铃形条带或“微笑”条带
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上样体积过大导致不完全堆积
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使用恰当的上样体积，样品不宜过稀
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电泳过程中电场不均匀
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如果蛋白浓度已知，上样时确保对称
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分离胶表面不平
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在制胶时使分离胶表面水平
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凝胶过期
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在指定的失效期前使用凝胶
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