硫喷妥钠的兔体药代动力学研究

药物-机体相互作用一方面是药物对机体的作用，产生药效、毒性或副作用，表现为药物的药理作用或毒理作用，决定于特定的化学结构，具有较强的结构特异性。

另一方面是机体对药物的作用：吸收、分布，生物转化和排泄，表现为药物的药代动力学性质。主要取决于药物的溶解性、脂水分配系数、电荷等药物分子整体的理化性质，结构特异性不强。

药代动力学是应用数学模型和计算公式阐明药物的体内过程随时间而改变的量变规律，从而揭示药物在体内的位置（房室）、浓度与时间的关系。本实验以药代动力学原理为指导，分析测定静脉麻醉时硫喷妥钠在血液中的浓度，研究体内血药浓度随时间变化的规律，为制定临床用药方案提供依据。

实验材料

1，动物

健康家兔12只，♀♂各半，体重（2.5+0.5）kg。安徽医科大学实验动物中心提供。

2 ，药物

硫喷妥钠，上海新亚药业有限公司，批号9910501，9902102。

3， 试剂

二氯甲烷，广州新港化工厂产品，批号950503。

0.45mol/l氢氧化钠溶液，临用前配制。

4，仪器

S53/54紫外可见分光光度计，上海棱光技术有限公司产品；

XW-80A旋涡混合器，上海精科实业有限公司产品；

TDZ5多管架自动平衡离心机，长沙湘仪离心机有限公司产品；

DL-5M低速冷冻离心机。

实验方法

1 ，动物实验部分

1.1 2.5%硫喷妥钠溶液的配制

取硫喷妥钠1支（0.5g），用2ml生理盐水充分溶解，取1ml至另一试管，加入生理盐水至10ml，混匀。

1.2 取家兔，称体重，置于兔架中。平底试管13只编号0-12，加入肝素数滴备用。

1.3 家兔注射部位去毛、热敷和消毒，待血管扩张后，以左手拇指与食指压住静脉耳根端，使静脉充盈，给药前用12号针头自耳静脉取血1-1.5ml，置于0管中。

1.4 将5号或7号针头平行刺入静脉，抽动针管，见有回血即可推注。静脉注射2.5%硫喷妥钠溶液20mg·kg-1。采用小量、缓慢注射法，以每30s注入1ml为宜。注射完毕后，拔出针头，用手或药棉压迫针眼片刻。（一般耳内缘静脉深不易固定，故不用或少用，外缘静脉浅易固定，常用。）

1.5于给药后5min、15 min、25 min、35min、45 min、1h、2h、3h、4h、5h、6h用12号针头自另一侧耳缘静脉采血1-1.5ml，血标本均用肝素抗凝。

1.6 分离血浆（3000r·min-1，10min）至另一试管，于-20℃保存，直至测定。

2， 血药浓度测定（紫外分光光度法）

2.1 硫喷妥钠标准溶液的配制

精密称取硫喷妥钠对照品100mg，用蒸馏水适量溶解，移入100ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，得1 mg·ml-1浓度的标准储备液，取储备液配制成3.125、6.25、12.5、25.0、50.0、100.0、200.0 μg·ml-1的硫喷妥钠标准溶液。

2.2 标准曲线的制备

精密称取3.125、6.25、12.5、25.0、50.0、100.0、200.0 μg·ml- 1的硫喷妥钠标准溶液0.1ml，分置10ml具塞试管中，加入0.45mol/l氢氧化钠溶液4ml，混匀。用0.45mol/l氢氧化钠溶液为参比，以1cm吸收池，于大约304nm波长处测定各管的吸光度，以硫喷妥钠C为横坐标，吸光度A为纵坐标，求得线性回归方程。

2.3 血浆标准曲线的制备

取空白血浆7份分置10ml具塞试管中，分别加入浓度为3.125、6.25、12.5、25.0、50.0、100.0、200.0 μg·ml-1的硫喷妥钠标准溶液0.1ml，每份用二氯甲烷4ml和3ml萃取两次（旋涡混合提取2min），离心（3000r·min-1，10min），合并萃取液6ml。向萃取液中加入0.45moll-1氢氧化钠溶液4ml，混匀（旋涡混合30s），离心（3000r·min-1，10min），抽取氢氧化钠层供测定。余同标准曲线制备项下。以硫喷妥钠C为横坐标，吸光度A为纵坐标，求得线性回归方程。

2.4 回收率和精密度实验

分别取空白血浆0.5ml，精密加入不同浓度的硫喷妥钠标准溶液，使其血浆浓度分别为6.25、25.0、100.0μg·ml-1。余同标准曲线制备项下。于1日内5次和连续5日内分别考察其回收率和日内、日间变异结果。

2.5 血浆样品测定

取血浆0.1ml，每份用二氯甲烷4ml和3ml萃取两次（旋涡混合提取2min），离心（3000r·min-1，10min），合并萃取液6ml。向萃取液中加入0.45mol/l氢氧化钠溶液4ml，混匀（旋涡混合30s），离心（3000r·min-1，10min），抽取氢氧化钠层供测定。用0min管为参比，以1cm吸收池，于大约304nm波长处测定各管的吸光度。

S53/54紫外可见分光光度计的正常基本操作：

1、开机自检与自校  开机后显示窗两侧8灯全亮，指示进入自检与自校状态，约需十余分钟。当TRANS灯亮即说明自校结束进入待机状态，可随时应用。
 

2、重调100%基线（基线校正） 在样品室通光位上置入参考样品；在λSTART、λEND、λINT三标尺下用▲或▼确定起始波长、结束波长、波长间隔参数值（缺省参数为200nm、1000nm、1nm）后，再按λPara至λNOW灯亮。先后按FUNC2、▲启动基线校正功能。
 

3、调零  按“0%”键，即能自动调整零位。
 

4、调整100%T  将用作背景的空白样品置入样品室光路中，盖下试样盖（同时打开光门）按一下“100%T”键即能自动调整100%T（一次有误差时可加按）。
 

5、设定波长  按λPara键到λNOW灯亮，按▲或▼至要求波长，再按λPara键确认，显示窗改变波长至设定值，即完成波长设定步骤。
 

6、改变试样槽位置让不同样品进入光路。
 

7、改变标尺  本仪器设有两类各四种标尺，第一类光度类有：TRANS．透射比、ABS．吸光度、FACT．浓度因子、CONC．浓度直读。各标尺间的转换用Mode键操作，并由“TRANS．透射比”，“ABS．吸光度”，“FACT．浓度因子”，“CONC．浓度直读”指示灯分别指示，开机初始状态为TRANS，每按一次顺序循环。第二类波长类有：λNOW当前波长、λSTART起始波长、λEND结束波长、λINT波长扫描间隔。

 

测定透明溶液的吸光度的应用操作：

自检校正→设定波长→置入空白→调100%T、0% T→置吸光度标尺→样品置入光路→读出数据

 

3 ，药动学参数的计算

血药浓度-时间数据采用实用药代动力学计算程序3P87（Practical PharmacokineticProgram-Version 87）进行处理。本程序可处理各种给药方法的线性和非线性药代动力学模型，给出有关药代动力学参数，适用于新药开发研制、药代动力学分析及临床药代动力学计算。3P87用全屏幕提示方式编辑和修改输入数据，并自动形成输入文件，可供随时调用或修改。计算结果建立输出文件，随时可以输出各种图表齐备的详细计算结果供用户分析研究，可对多剂量组数据进行批处理，给出统计结果，并备有简化系统，在输入数据后，即可得出结果。

 

3.1 3P87的调用

使用硬盘及一个软盘驱动器时，将3P87程序盘放入A驱动器，键入[A:3P87]并按[ENTER]键，即可显示3P87程序的首页，再任意按一键即显示主菜单（MAIN MENU）：1、输入或修改数据；2、用主数据计算药代动力学参数，选择模型；3、对多组数据的批处理；4、用户指定算法和条件计算药代动力学参数；5、计算结果输出；6、药代动力学参数计算的简化系统；7、药代动力学模型的说明；8、退出3P87程序。

 

3.2 在屏幕出现程序主菜单后，由键盘键功能数码[1]时，屏幕左上角显示Please Execute [a:inp]，键入a:inp并回车后，屏幕显示输入菜单（INPUT MENU），供输入功能的选择。其内容为：1、输入数据；2、修改标题文件；3、修改浓度-时间数据；4、增添浓度-时间数据；5、删除浓度-时间数据；6、显示输入数据；7、打印输入数据；8、返回主菜单。

在屏幕显示输入菜单后，由键盘键功能数码[1]时，即显示标题文件内容，用户按光标提示项目逐项输入标题文件内容，包括有：1、药名或文件名；2、实验对象；3、研制单位；4、日期；5、实验者；6、计算者；7、测定灵敏度；8、浓度单位；9、测定精密度（CV%）；10、时间单位；11、给药剂量单位。其中1、8、10和11项与实验记录及计算有密切关系，必须输入。

 

3.3 输入给药途径

屏幕显示三种给药途径：1、静脉推注；2、静脉滴注；3、非静脉给药。

 

3.4 输入剂量组数
 

3.5 输入各剂量组的个体数目、剂量和静脉滴注时的滴注时间
 

3.6 输入浓度-时间数据：1、输入主数据；2、数据记录序号；3、输入浓度-时间数据；4、建立输入文件；5、显示或打印输入文件。

3.7 药代动力学计算：1、用主数据进行计算；2、批处理的计算；3、指定算法和条件的计算
 

3.8 计算结果的输出

屏幕显示主菜单后，由键盘键功能数码[5]时，即进入输出程序，屏幕显示[File name]，要求键入文件名，并予确认，然后显示输出菜单（OUTPUT MENU），输出菜单包括5项：1、常规打印输出；2、个别计算结果显示；3、相关图及散点图；4、输出文件的清单打印；5、返回主菜单。在屏幕显示输出菜单时，键[1]则显示常规打印输出菜单（ROUTINE PRINT OUT），其内容有7项：1、标题文件；2、供选择模型用的计算结果；3、批处理的结果；4、用户指定计算的结果；5、个别数据的计算结果；6、统计矩结果；7、返回输出菜单。

供选择模型用的计算结果包括：1、拟合优度比较表；2、主数据拟合曲线；3、主数据的F检验；4、主数据的统计矩计算结果。

 

3.9 房室数的选择

可根据F检验和AIC值选择房室数，当F检验有显著意义（P<0.05或P<0.01）时，应取AIC值较小的房室数，当F检验无显著意义（P>0.05）时，则取房室数少者为宜。

 

3.10 权重选择

在估算药代动力学参数时，如何选择权重在实践和理论上都是一个重要的问题，为许多学者所关注。本程序中给出三种最常用的权重：1、1/C及1/C2，供用户选择。如何选择权重，至今意见不一，但有以下意见可供参考：首先比较拟合优度值（Goodness of fit），数值越小，表示拟合越好，如数值相等或相近时，再同时结合最低检测浓度，参考最大绝对误差及相对误差。一般来说，权重为1时，最大绝对误差较小，对高浓度数据拟合较好，有利于计算表观分布容积及生物利用度。权重为1/C2时，最大相对误差较小，对低浓度数据拟合较好，有利于计算消除相半衰期。权重为1/C时，通常能兼顾高低浓度的数据，但最大绝对误差及最大相对误差，往往并非最小。