DNA电泳常见问题分析

DNA电泳的MARKER怎么是扭曲的？

1、 配制胶时的缓冲液需要和电泳缓冲液不是同时配制的.最好是同时配制.电泳时缓冲液高过液面1－2mm即可。

2、 电泳时电压过高,可以在电泳前15分钟用较低电压(3V/cm),等条带出孔后比较漂亮了.然后再调电压。

3、 上样时尽量慢慢加样,等样品自然沉降后再加电压。

跑出的DNA带模糊？

1、DNA降解：避免核酸酶污染。

2、 电泳缓冲液陈旧:电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，pH值上升，缓冲能力减弱，从而影响电泳效果。建议经常更换电泳缓冲液。

3、 所用电泳条件不合适:电泳时电压不应超过20V/cm，温度＜30℃；巨大DNA链电泳，温度应＜15℃；核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力。

4、DNA上样量过多：减少凝胶中DNA上样量。

5、DNA样含盐过高：电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐。

6、 有蛋白污染：电泳前酚抽提去除蛋白。

7、DNA变性：电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀释DNA。

有不规则DNA带迁移?

1、 对于λ/Hind III片段cos位点复性：电泳前于65℃加热DNA 5分钟，然后在冰上冷却5分钟。

2、 电泳条件不合适：电泳电压不超过20V/cm；温度＜30℃；经常更换电泳缓冲液。

3、DNA变性：以20mM NaCl Buffer稀释DNA，电泳前勿加热。

跑出的DNA条带带弱或无DNA带？

1、DNA的上样量不够：增加DNA的上样量；聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳灵敏度稍高，上样量可适当降低。

2、DNA降解：避免DNA的核酸酶污染。

3、DNA走出凝胶：缩短电泳时间，降低电压，增强凝胶浓度。

4、 对于EB染色的DNA，所用光源不合适??应用短波长（254nm）的紫外光源。

跑出的DNA带缺失不完整是怎么回事?

1、 如果是小DNA带走出凝胶，可以缩短电泳时间或降低电压或增强凝胶浓度。

2、 分子大小相近的DNA带不易分辨??增加电泳时间，核准正确的凝胶浓度。

3、DNA 变性：电泳前请勿高温加热DNA链，以20mM NaCl Buffer稀释DNA。

DNA链巨大，常规凝胶电泳不合适??在脉冲凝胶电泳上分析。

凝胶回收DNA实验的关键在哪里?

最关键的是切胶之后,溶胶的那一步.切胶的时候要尽量把多余的琼脂糖凝胶切干净,按照实验步骤,第一步应该是将胶充分的溶化.这以后步一定要做充分,保证凝胶已经完全溶解了.加乙醇这步也很关键，当凝胶溶解后最好多过几次柱子。

还有就是洗脱的那一步。洗脱的时候最好用加热到60度的洗脱液洗脱，如果实在效果不好可以分两次洗脱。

切胶的时候如何能切的准呢？条带的位置肉眼很难判断出来，如何判断条带的位置呢？

可以将产物与Marker一起电泳，染色后，在紫外灯下观察结果，跟Marker进行相比，就知道要的是哪条带。注意，紫外灯下切胶速度要快，否则DNA会降解，另外，紫外线对身体伤害很大，特别是眼睛，请注意采取保护措施（比如在专门的箱子里切，带眼镜等）。

RNA 用具要用10%的NaOH浸泡过液，再用DEPC水冲洗干净70%的乙醇用过 国产分析乙醇有杂质，RNA酶还会有，并带入其它污染。