固定化酵母细胞及蔗糖酶的检测

一、实验目的

1. 学习固定化酵母细胞的方法。

2. 掌握蔗糖酶活力的检测方法。

二、实验原理

固相酶又称为固定化酶，是通过物理及化学的处理方法，使水溶性酶和固态的水不溶性支持物(或载体)相结合而制备的。通过酶的固定化可以将酶转变成不溶物同时仍保留酶的活力，在催化反应中具有诸多水溶性酶所不具备的优点。

常用的酶的固定化方法主要有：

1. 物理吸附法；

2.载体偶联法(键结合法)；

3.交联法；

4.包埋法；

就其应用技术而言，又分为固定化酶和固定化细胞二种。

相对于水溶性酶，固定化酶的优点主要是机械强度增加，稳定性提高，可回收反复使用。

三、 仪器和试剂

仪器

试管、1毫升吸管4支、水浴锅。

试剂

1. 海藻酸钠若干克；

2. K号酵母液；

3. 10％蔗糖液：称取10克蔗糖用水定容至100毫升；

4. 斐林甲、乙液。

四、操作步骤

l、称取海藻酸钠1克加入100毫升水中，微火加热溶解后冷却到30℃左右，将预先准备好的3克卡氏酵母(或K号酵母的培养液30毫升)的悬液加入混匀。 然后倒入下边装有胶管与止血夹的漏斗中，让其慢慢滴入4％氯化钙溶液中，制成直径2－3毫米的球形固定化酵母。

将此固定化酵母装入柱中，从柱上端加入10％的蔗糖液，控制一定的流速(10－17滴／分钟)。先流出的水解液要回流10分钟。最后所得流出液即为经固定化K号酵母水解的糖液，其成分为葡萄糖和果糖的混合液。

2、蔗糖酶的检测

吸取斐林甲、乙液各1毫升于干燥 试管 中，加入水解液1毫升，沸水中保温，观察颜色反应。有氧化亚铜沉淀的则说明蔗糖已被水解，管中有蔗糖酶的存在。
空白以10％蔗糖液做对照，其它同上。