微量定容测压法测定植物的呼吸速率

一、原理

微量检压计不仅用来研究有机体或部分组织的呼吸作用和发酵作用，而且也可以研究有关O2与CO2及其它气体交换的反应。如光合作用，酶的活性等。测压法的原理是在固定体积并保持恒温的密闭系统中，气体产生或消失的总量，可以利用气体定律计算求得。

二、材料、仪器设备及试剂

（一）材料：待测的小麦、水稻萌发种子。

（二）仪器设备：1. 瓦布格呼吸计（微量呼吸检质计）；2. 移液管；3. 量筒；4. 小镊子；5. 称量瓶。

（三）试剂：1. 20％KOH；2. 凡士林；3. 橡皮筋数根；4. 吸水纸；5. Brodie氏溶液：NaCl 23g，牛胆酸钠5g，溶于500ml水中，另加少许染料（酸性品红）使溶液染色，并加数滴浓麝香草酚酒精溶液作为防腐剂。

三、实验步骤

（一）种子吸氧量的测定

1. 取不同处理种子若干（体积约0.5ml左右），称其鲜重，然后用排水法测定其体积，先用滤纸将种子外面水分吸干，另取10ml量筒一个，内盛4～5ml的水，将种子放入量筒内观察水分上升体积，二次水分体积之差即为种子体积，将种子取出，用滤纸吸干附在种子外表的水分，然后将种子放入反应瓶的底部，再加0.5ml水

2. 在中央小槽内加入20％KOH0.2ml，为了增大吸收CO2的能力，可用1×2cm滤纸折叠后插入中央小槽内。并在中央小槽口上涂上少量凡士林，防止碱液逸出。

3. 侧管的玻璃棒涂以凡士林后塞紧。压力计口亦涂上凡士林和反应瓶连接，转动反应瓶，使封口凡士林呈透明为止，然后用橡皮筋将反应瓶固定在压力计上。

4.将压力计固定在水槽上，并打开活塞，平衡10～15min，在此过程中要检查反应瓶是否漏气。

（二）空白试验（作温压计用）：

因压力计左管口是与大气相通，实验时室内气压或水槽温度微小变化对读数均有影响，为此，必须进行校正。校正方法：即反应瓶中除不加种子外，其他处理与测压计完全相同。

（三）测定：

当反应瓶内温度与水槽温度平衡后，将压力计上的活塞关闭。开始振荡。并记录开始时间，每隔15min记录测压计及温压计左管液面高度，读数时关闭振荡器，并将压力计的右管液面调至150mm处，再记录左管液面高度，共计四次（共1h，读数时不能将活塞打开！）将结果按下表记录。

四、结果计算

（一）求K值（二）根据实际压力差值（h1.求氧的吸收量（μl）＝h×K；

计算呼吸速率（耗O2）呼吸速率（μl/g/h）＝h×K/[样品重(g)×时间(h)]