肝的生酮作用及酮体检出
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1.了解酮体生成的特点和意义；
2.掌握酮体检出的方法
【实验原理】
酮体是乙酰乙酸、β-羟丁酸及丙酮3种物质的总称。酮体是脂肪酸在肝脏氧化分解时形成的特有中间代谢物，是在特殊情况下肝脏向外输出能源的一种特殊方式。酮体代谢的重要特征是肝内生酮肝外用。
在正常情况下，糖供应充分，生物体主要依靠糖的有氧氧化供能，脂肪动员较少。血中仅含少量酮体，约0.05～0.85mmol/L(0.3～5mg/dl)。脑组织不能氧化脂肪酸，却能利用酮体。
在饥饿、糖尿病、高脂低糖膳食等情况下，酮体生成增加，小分子水溶性的酮体易通过血脑屏障和肌肉毛细血管壁，作为肌肉尤其是脑组织的重要能源。当肝内生酮的速度超过肝外组织利用酮体的能力时，导致血中酮体含量异常升高，称为酮血症。
此时尿中也可出现大量酮体，称为酮尿症。乙酰乙酸和β-羟丁酸都是较强的有机酸，当血中酮体过高时，易使血液pH下降导致酸中毒。酮症酸中毒是一种临床常见的代谢性酸中毒。因此，酮体的检出在临床上有重要的意义。
代谢性酸中毒治疗时除对症给予碱性药物外，糖尿病人给予胰岛素和葡萄糖，以纠正糖代谢紊乱，增加糖的氧化供能，减少脂肪动员和酮体的生成。
以丁酸作为底物与肝组织匀浆(内含合成酮体的酶系)保温后，即有酮体生成。酮体可与显色粉(亚硝基铁氰化钠等)产生紫红色物质反应；而经同样处理的肌肉匀浆则不产生酮体，故无显色反应。
【器材和试剂 】
1. 器材 试管及试管架、剪刀、恒温水浴箱、匀浆器、研钵、离心机
2. 试剂
(1)肝匀浆和肌肉匀浆。
(2)0.9％NaCl溶液。
(3)罗氏溶液：NaCl <chmetcnv> 0.9g/>，KCl <chmetcnv> 0.042g/>，CaCl <chmetcnv> 2 0.024g/>，NaHCO 3 <chmetcnv> 0.02g/>，葡萄糖 <chmetcnv>0.1g/>，溶解后加蒸馏水至100ml。</chmetcnv> </chmetcnv> </chmetcnv> </chmetcnv> </chmetcnv>
(4)0.5mol／L丁酸：取 <chmetcnv>44.0g/>丁酸溶于0.1mol/LNaOH溶液中，并用0.1mol/L NaOH溶液稀释至1000ml。</chmetcnv>
(5)1/15mol/L磷酸缓冲液(pH7.6)。
(6)15％三氯醋酸。
(7)酮体溶液。
(8)显色粉：亚硝基铁氰化钠 <chmetcnv> 1g/>、无水碳酸钠 <chmetcnv> 30g/>，硫酸铵 <chmetcnv>50g/>，混合后研碎。</chmetcnv> </chmetcnv> </chmetcnv>
3.动物 小鼠
【操作步骤】
(1)肝匀浆和肌肉匀浆的制备：取小鼠1只，断头处死，迅速剖腹，取出全部肝脏和部分肌肉组织，分别置于研钵中，用剪刀剪碎，加入生理盐水(按重量／体积＝1∶3)和少许细砂，研磨成匀浆。
(2)取 试管 2支，编号，按下表操作：
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试剂 |
1 |
2 |
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罗氏溶液（滴） |
15 |
15 |
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0.5mol/L丁酸溶液(滴) |
30 |
30 |
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1/15mol/L磷酸缓冲液(滴) |
15 |
15 |
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肝匀浆(滴) |
20 |
－ |
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肌肉匀浆(滴) |
－ |
20 |
|
置 <chmetcnv>37℃/>水浴箱中保温40～50min</chmetcnv> |
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15%三氯醋酸(滴) |
20 |
20 |
将1号和2号 试管 分别摇匀混和5min，离心沉淀约5min(3000r／min)，并取出上清液1号和2号备用。
(3)另取 试管 5支，编号，按下表操作：
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试剂 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
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上清液（1）（滴） |
20 |
－ |
－ |
－ |
－ |
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上清液（2）（滴） |
－ |
20 |
－ |
－ |
－ |
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酮体溶液（滴） |
－ |
－ |
20 |
－ |
－ |
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0.5mol/L丁酸溶液（滴） |
－ |
－ |
－ |
20 |
－ |
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酮尿（滴） |
－ |
－ |
－ |
－ |
20 |
(4)各管加显色粉1小匙(高粱米粒大)，观察各管颜色反应，并解释之。
【思考题】
- 从实验结果中反映出酮体代谢组织的特点是什么？
试验中三氯醋酸的作用是什么？
