MHC 四聚体助力细胞治疗基础研究：CTL 表位筛选

据统计，2015 年，我国癌症新发人数为 429.2 万。死亡人数 281.4 万，平均 5 年生存率 36.9%。肺癌、胃癌、肝癌、食管癌占到总数的 57%。细胞治疗，治疗病人的个体化差异较大。细胞治疗大有向精准发展趋势。

从临床角度，目前所开展的细胞治疗大多以 T 细胞为基础。血液肿瘤治疗，利用肿瘤特异性抗原（TAA）作为治疗靶点，使得 CAR-T 细胞治疗方法已得到有效验证，取得划时代性的突破。然而，利用 CAR-T 细胞治疗实体瘤的临床效果未能得到充分验证。因此，寻找有效治疗靶点，成为实体瘤细胞治疗基础研究的重要方向。

人们在对免疫过程的研究中发现并证实，特异性 T 细胞激活的前提条件是 T 细胞受体（TCR）和 MHC-肽复合物结合，因此细胞毒性 T 细胞（CTL）表位在其中起着至关重要的作用。

CTL 表位 （CTL epitope） 一般长度为 8-10 个氨基酸，是蛋白抗原经抗原递呈细胞（Antigen process cell，APC）加工处理，随后与 MHC-Ⅰ类分子结合并最终递呈给 TCR 识别，引起有效免疫应答的短肽。

CTL 表位的筛选和鉴定在特异性 T 细胞应答检测中应用越来越广泛，同时在免疫诊断、治疗及疫苗的开发等都有重要作用。CTL 表位的筛选和鉴定一直是生物治疗的关注点。

但传统的表位鉴定技术大多采用先合成大量的交叠肽，然后通过后续的淋巴细胞实验进行选取。这种实验方法费时费力、费用高并且鉴定效率低。MHC 四聚体技术的出现，为研究者创造了更为快捷高效的手段。

MHC 四聚体（MHC Tetramer）技术，是由美国斯坦福大学 John D. Altman 博士等人于 1996 年开发，用于抗原特异性 T 细胞的检测。

其原理是借助生物素、链霉亲和素系统，将 MHC 和肽形成 MHC-肽四聚体复合物，增强了 MHC-抗原肽复合物与 TCR 之间的结合力，从而可通过流式细胞技术检测或分选特异性 T 细胞，大大提高了特异性 T 细胞的检测灵敏度。该复合物制备过程如下图所示：

鉴于 CTL 表位在免疫系统中的重要性，MHC 四聚体技术在抗原特异 T 细胞的表位分析上的应用被高度关注。T 细胞表位筛选方案一般根据所要研究的抗原肽相关蛋白，设计并合成多个交叠肽，然后将其分别制备成 MHC 四聚体，并进行分组，形成多组 MHC 肽四聚体混合物。

用这些四聚体染色外周血单个核细胞（PBMC），通过流式细胞仪检测获得阳性反应组，随后将阳性反应组中所有的 MHC 四聚体再逐个染色 PBMC 鉴定，由此获得相关抗原蛋白的 T 细胞表位。这一筛选方案具有快速、灵敏、高效的优势。

近年来，已有研究者成功地将 MHC-肽四聚体技术应用于 T 细胞表位的鉴定工作。

HelixGenTM MHC 四聚体试剂

广州好芝生物推出的近 300 种 HelixGen TM MHC 四聚体产品，能快速、简便地实现对抗原特异性 T 细胞（Antigen-specific T cells）的定性与定量分析。适用于全血、外周血单核细胞（PBMCs）、细胞系等样本类型

四聚体技术优势

与其他应用于 T 细胞检测的传统方法相比，如酶联免疫斑点检测（ELISPOT）、单细胞 PCR 等，MHC 四聚体分析技术具有以下优势：

高灵敏度：可检测血液中低丰度（≤1%）的抗原特异性 T 细胞?高特异性：极大提高了 TCR 与 MHC-抗原多肽复合物结合的特异性

稳定性好：检测结果一致性好，可重复性高

多样化/个性化：可定制，合成特异的抗原多肽片段，组合成各种 T 细胞选择性 MHC 四聚体?定性/定量分析：可结合流式细胞术实现对抗原特异性 T 细胞群的定性/定量分析

个性化定制服务流程

1. 客户提供需要定制的四聚体的 Peptide、MHC Restriction。

2. 我们免费帮客户分析肽段亲和力并评估是否达到合成要求（1-2 个工作日）。

3. 确认订单：

1）亲和力评分达到合成要求：直接下单生产；

2）亲和力评分未达到合成要求：根据客户的需求确认订单，但客户需要承担因合成失败所花费用。

4. 生产、质检（4-6 周）。

5. 发货

推荐阅读：

1）CTL 表位筛选

[1] Heo Y, Hwang S, Kwon O, et al. Structural aspect of novel HLA-undefined02 allele, A *0286,identified by sequence-based typing[J ]. Tissue Antigens, 2006, 67 （1）：84-85.

[2] Altman J, Moss P, Goulder P, et al. Phenotypic analysis of antigen-specific Tlymphocytes[J].Science,1996;274（5284）：94-96.

[3] Murali K, Altman J, Suresh M, et al. Counting antigen-specific CD8 T cells :a revaluation of bystander activetion during viral infection[J].Immunity,1998,8 （2）：177-187.

[4] Novak E J, Liu A W, Gebe J A, et al. Tetramer-guided epitope mapping :rapid identification and characterization of immunodominant CD4+ T cell epitopes from complex antigens[ J].J Immunol,2001,166（11）：6665-6670.

[5] Reijonen H, Kwok W W. Use of HLA class II tetramers in tracking antigen-specific T cells and mapping T-cell epitopes[ J].Methods,2003,29（3）：282-288.