iTRAQ蛋白质定量与生物标志物发现技术平台

定量蛋白质组学是蛋白质研究的前沿学科。目前常用的定量蛋白质组学研究技术有荧光差异凝胶电泳（DIGE）、同位素亲和标记（ICAT）等。同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）技术是近年来最新开发的一种新的蛋白质组学定量研究技术。结合非凝胶串联质谱技术，该技术可对复杂样本、细胞器、细胞裂解液等样本进行相对和绝对定量研究，具有较好的定量效果、较高的重复性，并可对多达8种不同样本同时进行定量分析。

蛋白质组学的研究非常复杂，仅仅知道蛋白质的身份并不足以最终确定蛋白质，因为蛋白质的浓度对于实现其在细胞中的功能来说极其重要，一种特殊蛋白质在浓度上的变化，就能预示细胞的突变过程。因此，科学家能够对蛋白质的相对和绝对浓度进行测量，是很重要的事情。过去，科学家通常先进行二维（2D）凝胶电泳，切断条带，再用质谱方法测量条带中的蛋白质。而采用iTRAQ蛋白质定量技术可以加速蛋白质的定量研究，基于高度灵敏性和准确性的串联质谱方法，不需要凝胶，就可以获得蛋白质相对和绝对的结果。iTRAQ试剂盒包括8种同量的氨基反应试剂，能对蛋白质水解的肽段标记，因此采用串联质谱方法，可以对肽段进行准确的鉴定和定量。iTRAQ的操作程序非常简单，既可以直接标记蛋白质，也可以将蛋白质酶解为肽段，然后用iTRAQ试剂进行差异标记。再将标记物混合，这样就可以对其进行比较。与样本结合后，用2D液相色谱串联质谱进行分析。在质谱分析鉴定特殊肽离子片段结构的基础上采用Protein Pilot软件包对每一个肽段进行鉴定。

技术路线图：

iTRAQ定量实验，操作简便没有更多烦琐的额外操作步骤，相对于一般的蛋白质组分析流程，iTRAQ定量只增加了简单的一步，iTRAQ标记，反应效率高、时间短，不会增加工作量。只要掌握了一般的蛋白质组学分析技术，就能完成iTRAQ定量实验。

主要特点：

1、一次实验同时定量4或8个样品，极大提高了通量。

2、技术路线简单，不需要额外的烦琐操作。

3、能够增强二级碎片离子信号，能产生更好的y离子和b离子系列，二级谱图质量更好。

4、标记所有的肽段，提高了蛋白质组的覆盖率，包括翻译后修饰，而且提高了鉴定和定量的可信度。

由于iTRAQ定量实验具有操作简单、重复性好、定量效果好等特点，所以得到大家的认同和喜爱，并且逐渐成为蛋白质组学定量研究技术的主流。