七个不同产地牛蒡子中牛蒡苷的含量比较

　　【摘要】 目的对七个不同产地牛蒡子中的牛蒡苷进行含量测定，做出质量评价。方法采用薄层色谱法(TLC)进行定性鉴别，高效液相色谱法(HPLC)进行含量测定。结果吉林产牛蒡子中牛蒡苷含量最高,质量较好；甘肃定西、四川康定、宁夏银川产牛蒡子中牛蒡苷的含量亦较高。结论甘肃虽不是牛蒡子主产区，但甘肃定西栽培及野生牛蒡子中牛蒡苷含量较高，质量较好。

　　【关键词】 牛蒡子；牛蒡苷；薄层色谱法；高效液相色谱法；含量测定

　　1仪器与试药

　　美国安捷伦Agilent 1100型高效液相色谱仪；牛蒡苷对照品（由中国药品生物制品鉴定所提供，批号0819－9802）；甲醇（色谱纯）；水为纯净水；其他试剂均为分析纯；七个地区牛蒡子药材分别采集或采购于各自产地，由甘肃中医学院李成义教授鉴定为菊科植物牛蒡Aretium lappa L.的干燥成熟果实。

　　2方法与结果

　　2.1 定性鉴别

　　2.1.1 对照品溶液的制备

　　精密称取牛蒡苷对照品适量配制成行气活血、疏通经络的作用。生理解剖学也证实，华佗夹脊穴周围是脊神经所在，深层分布着脊神经节，它们借节间支连成交感神经，交感神经干与脊神经的连结点在体表的投影与华佗夹脊穴密切相关。

研究还进一步证实，针刺华佗夹脊穴不但可影响脊神经后支还可涉及其前支，前支与交感干相联系，能影响交感神经，从而与脏腑活动相关，具有调节脏腑气血的功能。因此，针刺华佗夹脊穴有调节植物神经系统功能的作用，可使交感、副交感神经的拮抗作用协调统一，从而治疗植物神经系统紊乱引起的疾病。

从华佗夹脊穴与经络、脏腑、神经之间的特异联系可以看出，其穴区分布有脊神经节，且穴位分布广泛，故而其整体作用明显，疗效持久，共同达到宽膈止呃、甚而治疗顽固性呃逆的作用。

　　本观察治疗中第2组穴选取璇玑、膻中、中脘、梁门（双）、天枢（双）、气海，其中膻中为“气会”，璇玑与膻中可调理上焦之气，中脘与梁门可调中焦气之枢纽，和胃降逆，而天枢与气海可调下焦之气。上中下三焦之气既达，上下宣通，气机调畅，更兼第1组华佗夹脊穴腹背阴阳相配，引阳而出阴，共奏宽膈舒胸、理脾和胃、降气止呃之功。0.5 mg/mL的对照品溶液，备用。

　　2.1.2 对照药材溶液的制备

　　取牛蒡子对照药材粉末0.5 g，加乙醇20 mL，25 ℃下超声处理30 min，滤过,滤液蒸干，残渣加乙醇2 mL溶解，作为对照药材溶液。

　　2.1.3供试品溶液的制备

　　取牛蒡子药材粉末0.5 g，加乙醇20 mL，25 ℃下超声处理30 min，滤过,滤液蒸干，残渣加乙醇2 mL溶解，作为供试品溶液。

　　2.1.4 薄层色谱检识

　　依照薄层色谱法试验方法，吸取上述对照品溶液、对照药材溶液、供试品溶液各10 μL，分别点于同一块以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷―甲醇―水（40∶8∶1）为展开剂，上行展开8 cm取出，晾干， 20 %硫酸乙醇溶液显色，105 ℃加热至斑点显色清晰。

　　结果显示各供试品溶液色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。结果见图1。

　　1.对照药材；2.定西（栽培1）；3.定西（栽培2）；4、8.对照品；5.定西野生； 6.四川康定； 7.宁夏银川； 9.山东济南； 10.平凉； 11.吉林； 12.河南

　　2.2七个不同产地牛蒡子中牛蒡苷的定量分析[4]

　　2.2.1 色谱条件

　　Agilent 1100型高效液相色谱仪，色谱柱为ZORBAX SB－C18（4.6 mm×250 mm），流动相为甲醇―水（43∶57），检测波长280 nm,流速1.0 mL/min，柱温20 ℃,进样量10 μL，理论塔板数按牛蒡苷峰面积计算均不低于1 500。

　　2.2.2 对照品溶液的制备

　　精密称取牛蒡苷对照品适量，加甲醇溶解，配制成0.5 mg/mL的对照品溶液,备用。

　　2.2.3 对照药材溶液的制备

　　精密称取对照药材粉末（过三号筛）0.5 g,精密称定，置50 mL容量瓶中，加甲醇约45 mL，30 ℃下超声(150 W, 20 kHz)处理20 min,加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，微孔滤膜（0.45 μm）滤过，作为对照药材溶液。

　　2.2.4 供试品溶液的制备

　　精密称取各药材粉末（过三号筛）0.5 g,精密称定，置50 mL容量瓶中，加甲醇约45 mL，30 ℃下超声(150 W,20 kHz)处理20 min,加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，微孔滤膜（0.45 μm）滤过，作为供试品溶液。

　　2.2.5样品测定

　　精密吸取对照品溶液、对照药材溶液、供试品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪中进行测定，得牛蒡苷色谱峰面积，用外标法计算样品中牛蒡苷的含量。

　　结果显示七个不同产区牛蒡子中，吉林产牛蒡子中牛蒡苷含量最高，甘肃定西、银川、四川康定产牛蒡子质量次之，本实验在济南与平凉所采集到的牛蒡子质量较差,未达药典标准（《中华人民共和国药典》规定牛蒡子干燥药材中牛蒡苷含量不得低于5.0 ％）。结果见表1表1不同产地牛蒡子中牛蒡苷含量比较

　　3讨论

　　本实验TLC定性鉴别时考察了点样量（3 μL、5 μL、7 μL、10 μL、15 μL）及饱和时间（0，10，15，20，30 min）对边缘效应、Rf值、斑点清晰度与扩散度的影响。结果发现饱和时间越长Rf值越小，这点与李慧义等人在牛蒡子中木质素的薄层扫描测定一文中的结论是一致的[5]。但选择饱和15 min以上时边缘效应基本消除，故确定饱和时间为15 min，点样量为10 μL。

　　TLC定性鉴别显色时考察了显色剂的浓度及显色方法，发现硫酸乙醇体积分数为20 %时，用浸渍法显色效果好，故用20 %硫酸乙醇浸渍显色。

　　各产地牛蒡子HPLC色谱图均在7.139 min处出现吸收峰，但吉林产牛蒡子HPLC色谱图与其他产地牛蒡子及对照药材的HPLC色谱图相比较,在7.139 min处出现的吸收峰峰面积较大,含量较高,但此成分的含量是否与牛蒡子质量优劣有关及其结构还有待于进一步研究。

　　通过实验比较东北吉林所产的道地药材牛蒡子质量较好，此外甘肃虽不是牛蒡子的主产地，但在定西地区栽培及野生的牛蒡子中牛蒡苷含量也较高，这为我省栽培牛蒡子提供了质量评判的科学依据，为丰富我省栽培药材资源提供了参考。

　　【参考文献】

　　[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：化学工业出版社,2005:48-49.

　　[2]任常胜，朱庆龄.牛蒡子的研究概况[J].中国民族医药杂志, 2003，12（增刊）:36-39.

　　[3]王劲,沙明,杨供武，等.HPLC法对不同地区商品牛蒡子中牛蒡苷元的定量分析[J].中草药，2003,34（5）：467.

　　[4]Gao Y, Kang T G, Zhang X Y. Studies on the calium antagonist action of arctigenin [J]. Chin Tradit Herb Drugs(中草药)，2000，31（10）：758-762.

　　[5]李慧义,罗淑荣.牛蒡子中木脂素的薄层扫描测定[J].色谱,1995，13（4）：278－279.