瘤细胞的GFP转染问题

qdshlyykqk：我是新手，正在进行肿瘤细胞的GFP转染，有些问题想请教大家。因为在网上看到大家众说纷纭，一时拿不定主意。

1、利用转染之前的细胞进行G418筛选来确定最佳筛选浓度，是以1周还是2周完全杀死细胞为标准？有人说以1周的浓度作为将来转染之后的快速筛选阳性细胞的浓度，在对照组的为转染细胞大部分或全部死亡之后，以上述2周时的浓度作为维持浓度。有人说维持浓度应该是筛选浓度的1/2。究竟有没有一个标准，或者怎样做才算是比较标准和可靠的依据。

2、如果我以24获96孔板铺板，在进行转染之前的最佳浓度确定时，各板每孔加入的细胞数量以多少比较合适？24孔板和96孔板有没有什么太大的区别？

3、再进行G418浓度梯度设定时，以多少递进比较合适？50μg/ml？100μg/ml？

谢谢大家的指教！祝各位老师工作顺利！

丁香园网友xiongcy1984认为：

我是以10天左右使细胞死光作为筛选浓度，等筛出稳定细胞株后将浓度减半作为维持浓度。

对于铺板的问题，对不同的细胞所需要的密度不一样，建议作一个梯度，找一个最佳的密度。

G418我用的浓度为400μg/ml，100μg/ml 太低了吧？