薄层层析和纸层析

一、实验目的：

1．了解色谱法的基本原理及薄层层析和纸层析的用途

2．学习并掌握薄层层析和纸层析的操作方法

二、实验原理：

色谱法的基本原理是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能的不同。或其它亲和作用性能的差异，使混合物的溶液流经该物质，进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组分分开。

用途：分离，纯化，鉴定有机物的重要方法。

溶质的最高浓度中心至原点中心的距离

溶剂前沿至原点中心的距离

三、所用试剂及仪器：

偶氮苯，苏丹III，偶氮苯和苏丹三混合物，9:1环己烷：乙酸乙脂，天门冬氨酸 蛋氨酸，茚三酮乙醇溶液；薄层板，毛细管，展开缸，10：50：2的水-乙醇-冰醋酸。

四、操作步骤：

（一）薄层层析：偶氮苯和苏丹III的分离

2. 薄层板的制备：将3g硅胶G和5%羧甲基纤维素钠(CMC)水溶液混合调匀呈糊状，倾倒在洁净的玻璃片上，制成均匀平整的薄层板。室温放置0.5h后，防入 烘箱 中110 0 C,0.5h取出备用。
4. 点样：在距离薄层板一端1.5cm处，用铅笔轻轻划一条线起始线，并用毛细管分别点上偶氮苯，混合样，苏丹III。

6. 展开：用9：1的环己烷-乙酸乙脂为展开剂，待样点干燥后，放入展开瓶中展开（注意：展开剂不易过多，使样点浸入0.5cm为宜）当展开剂到达薄板上端1cm处时，将薄板取出，并用铅笔划出溶剂前沿。观察分离情况计算并比较二者的R f 值。

（二）纸层析：天门冬 氨基酸 和蛋氨酸的分离

在特定展开剂中分配系数的不同，采用标准样品和试样在同一张层析纸上进行层析。比较它们的R f 值，以达到分离和鉴定 氨基酸 的目的。

2. 吸取20ml展开剂（10：50：2的水-乙醇-冰醋酸），放入展开缸中，按图3.38制备层析 滤纸
4. 点样（同薄层层析）
6. 展开：待样点干燥后，小心地置于事先盛有展开剂的展开缸中。
8. 显色：当溶剂前沿到达终点线时，取出纸条并用吹风机吹干，将茚三酮溶液均匀地喷在 滤纸 上，干燥后出现红斑点。
10. 求R f 值，对照标样和混合样品的R f 值，以鉴定混合样中的氨基酸。

注意事项

2. 制板时要求薄层平滑均匀，无裂缝。

4. 放入展开瓶中的溶剂不易过多

5. 点样时不要刺破薄板

6. 点样管切勿弄混