药物代谢检测技术

药物及其代谢物可以在用药者的尿液中被检测到，所以用药者的尿液经常被作为检测样本用来判别是否存在滥用药物行为或检测药物代谢情况。目前，临床及毒理实验室对尿液中药物及其代谢物的检测方法主要有气相色谱法（GC）、液相色谱法（HPLC）、气相色谱质谱法（GC-MS）、液相色谱质谱法（LC-MS）等，这些检测方法通常需要对尿液中药物或其代谢物进行提取处理，主要的提取处理方法有：液液萃取法（LLE），固相萃取法（SPE），固相微萃取法（SPME）和固相支撑法（SLE）等。

MicroSep^® DPXtips 的分散萃取技术（Dispersive Pipette Extraction，DPX）是一种新型 SPE 技术，在样品处理过程中通过液体湍流作用促使分散树脂与待测物质更充分地结合，可提高吸附与解吸附的效率，实现待测物质地快速提取、净化与浓缩，可同时对多种药物进行检测。同时 MicroSep® DPXtips 能完美地与多种自动液体移液器联合使用，通过简单的吸液/排液过程完成样品的纯化，并且可以高通量的处理样品，在 10 分钟内同时完成 96 个样品的纯化。

下面介绍使用 MicroSep^® DPX-WAX/RP 枪头式分散固相微萃取柱对尿液中 药物及其代谢物进行 LC-MS/MS 法检测的样品前处理流程：

1、净化：

（1）平衡活化：将 MicroSep^® DPX-WAX/RP 枪头式分散固相微萃取柱在 30% 甲醇溶液中吸液/排液；

（2）取样结合：将 MicroSep^® DPX-WAX/RP 枪头式分散固相微萃取柱在 250 µL 待净化的样品中反复吸打 3 次；

（3）洗涤：在水溶液中吸液/排液；

（4）洗脱：反复吸打 150 µL 1 % 甲酸甲醇溶液 3 次；

（5）上样：在洗脱液中加入 750 µL 水溶液稀释, 供 LC-MS/MS 测定。

2、检测方法

(1) 色谱条件

色谱仪：Agilent 1260 高效液相色谱仪

色谱柱：Agilent Poroshell EC-C18（50 mm × 3.0 mm, 2.7 µm）

进样量：10 µL

(2) 质谱条件

质谱仪：Thermo TSQ Vantage 三重四级杆串联质谱仪

离子源：电喷雾离子源（ESI）

采集方式：多反应监测（MRM）

毛细管电压：4 kV

3、待检测样品较多时，有没有更好的解决方案？

MicroSep^® DPX Tips 可适配 Hamilton，Integra 等自动移液系统，轻松实现高通量样品制备。（大部分型号的 LC 都有 96 孔板的适配器，可以在 96 孔板中完成样品制备并直接上样 LC，但 GC 一般没有 96 孔板的适配器，所以如果在 96 孔板中完成样品制备后，需有合适方法将样品转移至 GC 的进样瓶中。

推荐方案一：Integra Assist/Assist Plus + 1250 μL MicroSep^® DPX Tips

Integra Assist 可一次处理 1～12 个样品（Assist Plus 可适配可调间距移液枪），界面简单，可通过简单的操作将所需净化处理过程存储为程序方便重复使用。

优点：价格便宜，操作简便，方便样品转移（无论是 LC 还是 GC 都很方便使用）

缺点：处理样品相对较少；板位较少，可能需要人工加各步所需缓冲液

推荐方案二：Integra Viaflo 96 + 1250 μL MicroSep^® DPX Tips

Integra Viaflo 96 微孔板移液器，是一款经济实用型的电动移液系统，主要使用 96 孔板，界面简单，可通过简单的编程将所需净化处理过程存储为程序方便重复使用。

优点：价格适中，操作简便，32 个以下样品可实现全自动处理（视具体实验过程）

缺点：较多样品时，需手动换板；如后端是 GC，则需要 VOYAGER II 辅助完成样品转移。

推荐方案三：Hamilton Microlab^® 液体处理工作站 + 1 mL MicroSep^® DPX Tips

Microlab^® STAR 系列工作站是以液体处理为核心的生物医药实验室自动化操作平台的巅峰之作，拥有多项世界领先水平的专利技术，也是用户定制型自动化实验操作平台，可进行自动的加样、试剂分配、超微量移液，以及与液体处理相关的振荡、孵育等操作。如果整合第三方设备，可将整个实验流程实现全自动化。

Microlab^® NIMBUS 是紧凑而灵活的小型自动化移液系统，它基于 Hamilton 优良的工作站传统，适用于小通量的应用。NIMBUS 高效率的台面设置提高了最快的速度、最高的吸头定位精度以及移液准确性。

优点：功能强大，高通量、实验流程全自动，结合 MicroSep^® DPX Tips 可完美解决食品安全、司法鉴定、药物代谢、医药研发等检测、分析、科研领域的各种样品制备、提纯问题。

缺点：程序编制较复杂

推荐方案四：TECAN Freedom EVO^® 液体处理工作站 + 1 mL MicroSep^® DPX Tips

Tecan Freedom EVO 全自动工作站提供精确可靠的移液操作，整合丰富多样的实验设备，实现多种实验过程的自动化，从而实现高通量、标准化。Freedom EVO 提供完全的定制服务，科学家可根据自己的实验需要选购、安装功能模块，拥有个性化的自动化设备。同时，简单易用且完全开放的软件系统让科学家能随心所欲的开展工作，并能互相交流。 Freedom EVO 广泛应用于生物学研究领域、法医学、药物研发和化学等领域。

优点：功能强大，高通量，结合 MicroSep^® DPX Tips 可用于食品安全、司法鉴定、药物代谢、药物研发等领域样品制备、提纯、检测。

缺点：程序编制较复杂

图片来源：微色谱