如何选择合适的核酸提取仪
生物学霸
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生物技术的发展日新月异,随着 PCR 技术在医学(疾病检测)、农业(转基因检测)以及其他各个方面的应用,高通量的样本核酸提取已经迫在眉睫,很多厂商推出了全自动核酸提取仪,其中各种原理的都有:有的中看不中用的,有的不仅贵还不好用的;乱花渐欲迷人眼,选择一款核酸自动提取仪时,免不了要细细分析,不然花了冤枉钱,还整了一堆摆设回来。
市面上这些多如牛毛的全自动核酸提取仪,大多采用两种原理:离心柱法和磁珠法。
离心柱法全自动核酸提取仪采用离心机和自动移液装置相结合的方法,通量一般在 1~12 个样本,时间上和手工提取差不多,并不能显著提高效率,价格也不便宜,耗材还不通用,一般的实验室采用这种核酸提取仪通常会因为经费压力山大;如果你在实验室里发现了这货,老板一定是土豪无疑了,大可放心去抱其大腿。
离心柱法全自动核酸提取仪采用离心机和自动移液装置相结合的方法,通量一般在 1~12 个样本,时间上和手工提取差不多,并不能显著提高效率,价格也不便宜,耗材还不通用,一般的实验室采用这种核酸提取仪通常会因为经费压力山大;如果你在实验室里发现了这货,老板一定是土豪无疑了,大可放心去抱其大腿。
磁珠法自动核酸提取仪又可细分为磁棒法和抽吸法,先说抽吸法,顾名思义,抽吸法就是通过自动移液装置来进行,通过自动移液装置来完成:加入裂解液 —> 磁珠吸附 —> 抽走裂解液 —> 加入漂洗液 —> 磁珠吸附 —> 抽走漂洗液 —> 加入洗脱缓冲液。从步骤上好像没什么问题,但是抽吸法最大的问题在于,为了在去除废液的时候不抽走磁珠,移液器不能靠磁珠太近,以防磁珠和废液一同被抽掉,因此每一次抽废液的时候总有一小部分不能彻底的抽走,特别是磁铁在底部的装置,因为磁珠被磁铁吸附在底部,所以移液器不能靠底部太近,这样漂洗液就不能完全去除,残留的漂洗液中的盐和乙醇会影响后面的洗脱效率和 PCR 成功率;磁铁在侧面的装置残留的液体会少些,但是洗脱的效率也不好,想要依靠 DNA 自行溶解到洗脱缓冲液中,那就要等上半小时以上。所以有些 96 自动核酸提取工作站,提取一轮的时间需要 150 分钟,32 磁棒法的同样的时间可以提 5 轮了。
再说磁棒法核酸提取仪,通量通常有 8、16、32、96 通道,相对于抽吸法,磁棒法的优点是每一步的液体不残留,因为磁棒只带走磁珠,转移到下一个步骤相应的反应孔中,另外选择采用磁棒法的提取仪器尽可能选择功能齐全的,比如可以加热,每个加热槽最好独立温控,这样可以设置加热、裂解、洗脱的不同温度;另外很重要的一点是,带动磁棒的电机要能带动磁棒进行液体的快速混匀和搅拌,这样才有利于自动化和使裂解、漂洗更加彻底。磁棒法的通量选择最好是 32 通道, 96 通道的看似通量更高,但是 96 个磁力棒在从一个板转移至另外一个板的时候,磁力棒上面的液体中途可能会滴下来,滴到别的孔中会造成污染,从而影响实验。而 32 通道的磁力棒运行轨迹不经过其他样本的上空,这样就避免了交叉污染的可能。
说了这么多,对于如何选择核酸提取仪,你一定胸有成竹了。下次老板再调皮乱买核酸提取仪时,你一定可以让他刮目相看。